AAV-293

La linea cellulare AAV-293 è una linea permanente ottenuta da reni umani embrionali primari trasformati con DNA di adenovirus umano di tipo 5. I geni codificati dalla regione E1 dell'adenovirus (E1a ed E1b) sono espressi in queste cellule e partecipano alla transattivazione dei promotori virali, consentendo a queste cellule di produrre elevati livelli di proteine.

L'AAV-293 è derivato dalla linea cellulare parentale 293; attraverso il clonaggio e molteplici cicli di test, l'AAV-293 è stato specificamente selezionato per un alto livello di produzione di AAV in un sistema privo di helper. Offre diversi vantaggi rispetto alle normali cellule 293: Una superficie cellulare più ampia che determina una maggiore trasfezione e una migliore resa di AAV.

I vantaggi sono una morfologia appiattita, un fissaggio stabile alla piastra di coltura e le cellule sono ideali per colture su larga scala e per la produzione di AAV. Il virus adeno-associato (AAV) appartiene alla famiglia dei Parvoviridae, un gruppo di virus tra i più piccoli a DNA a singolo filamento e non sviluppati.

Ad oggi sono stati segnalati nove diversi sierotipi di AAV. L'AAV può infettare sia le cellule in divisione che quelle non in divisione e può essere mantenuto nella cellula ospite umana, creando il potenziale per un trasferimento genico a lungo termine. L'AAV-2 ricombinante è il sierotipo più comunemente utilizzato per la somministrazione di geni e può essere prodotto ad alti titoli con un virus helper o con cellule AAV-293.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia