Langsung ke isi
AAV-293
Tisu
Ginjal embrionik
Sinonim
AAV293

Dokumen

AAV-293

Cell line · Nomor produk 305127

Garis sel AAV-293 adalah garis sel permanen yang dibentuk dari sel ginjal embrio manusia primer yang telah ditransformasi dengan DNA adenovirus manusia tipe 5. Gen-gen yang dikodekan ...

€430.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim

Penyesuaian / Rekomendasi

Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
  • CoA
1

01Informasi umum

Deskripsi

Garis sel AAV-293 adalah garis permanen yang dibuat dari ginjal manusia embrionik primer yang ditransformasikan dengan DNA adenovirus tipe 5 manusia. Gen yang dikodekan oleh wilayah E1 adenovirus (E1a dan E1b) diekspresikan dalam sel-sel ini dan berpartisipasi dalam transaktivasi promotor virus, yang memungkinkan sel-sel ini menghasilkan protein tingkat tinggi.

AAV-293 berasal dari garis sel 293 orang tua, melalui kloning dan beberapa putaran pengujian, AAV-293 secara khusus dipilih untuk produksi AAV tingkat tinggi dalam sistem bebas pembantu. Ini menawarkan beberapa keunggulan dibandingkan sel 293 biasa: Luas permukaan sel yang lebih besar sehingga menghasilkan transfeksi yang lebih tinggi dan hasil AAV yang lebih baik.

Keuntungannya adalah morfologi yang rata, perlekatan yang kuat pada pelat kultur, dan sel-selnya ideal untuk kultur skala besar dan produksi AAV. Adeno-associated virus (AAV) termasuk dalam keluarga Parvoviridae, sekelompok virus di antara yang terkecil dari virus DNA beruntai tunggal dan tidak berselubung.

Ada sembilan serotipe AAV yang berbeda yang dilaporkan hingga saat ini. AAV dapat menginfeksi sel yang membelah maupun yang tidak membelah dan dapat dipertahankan di dalam sel inang manusia, sehingga berpotensi untuk transfer gen dalam jangka panjang. AAV-2 rekombinan adalah serotipe yang paling umum digunakan dalam pengiriman gen, dan dapat diproduksi dengan titer tinggi dengan virus penolong atau sel AAV-293.

Tisu
Ginjal embrionik
Sinonim
  • AAV293

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Seks
Perempuan
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This HEK293-derived AAV-293 line contains clonal modifications supporting AAV vector production. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Epitel

04Pengidentifikasi

Referensi
AAV-293 (nomor katalog Cytion 305127)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6871

05Penanganan dan budidaya

Media kultur
DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat (Nomor artikel Cytion 820300a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS, 0,1 mM NEAA
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dari sel yang melekat dan cuci dengan PBS yang tidak mengandung kalsium dan magnesium. Untuk labu T25, gunakan 3-5 ml PBS, dan untuk labu T75, gunakan 5-10 ml. Kemudian, tutupi sel sepenuhnya dengan Accutase, menggunakan 1-2 ml untuk labu T25 dan 2,5 ml untuk labu T75. Biarkan sel diinkubasi pada suhu kamar selama 5 menit untuk melepaskannya. Setelah inkubasi, campurkan sel secara perlahan dengan 10 ml medium untuk meresuspensi sel, kemudian sentrifugasi pada 300xg selama 3 menit. Buang supernatan, resuspensi sel dalam medium segar, dan pindahkan ke dalam labu baru yang sudah berisi medium segar.
Pergantian cairan
2 hingga 3 kali per minggu
Pencairan dan pembiakan

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

07Donatur

Usia donor
Janin