HaCaT-ras II-4

Les cellules HaCaT-ras II-4 constituent un modèle cellulaire remarquable et largement étudié en sciences biologiques. Ces cellules sont issues de kératinocytes cutanés humains immortalisés spontanément, connus sous le nom de cellules HaCaT, qui ont été modifiées par transfection avec l’oncogène c-Ha-ras (EJ). La sélection de ces cellules s’est fondée sur leur résistance au G418, un antibiotique sélectif, comme le décrit l’étude approfondie menée par Boukamp et al. en 1990.

Une caractéristique notable des cellules HaCaT-ras II-4 est leur nature tumorigène. Lorsque ces cellules clonales sont injectées à des souris Balb/c-nu/nu, elles présentent un comportement fascinant en formant des carcinomes épidermoïdes hautement différenciés et localement invasifs. Cette propriété unique permet aux chercheurs d’étudier les mécanismes de développement et de progression tumorale dans un environnement expérimental contrôlé.

Les cellules HaCaT-ras II-4 proviennent principalement de la population caucasienne, ce qui garantit la pertinence pour un groupe ethnique spécifique dans le cadre des recherches scientifiques. Leur origine et leurs caractéristiques en font une ressource inestimable pour les chercheurs intéressés par l’étude de divers aspects de la biologie et de la différenciation cutanées.

Ces cellules présentent un phénotype partiellement à entièrement différencié dans des conditions de culture typiques. Ce phénotype est attribué à la présence abondante de calcium tant dans les milieux de culture traditionnels que dans le sérum fœtal bovin, ce qui offre un environnement idéal permettant aux cellules de présenter des caractéristiques semblables à celles des cellules cutanées matures. Cette particularité permet aux chercheurs d’étudier les processus complexes impliqués dans le développement cutané, la cicatrisation des plaies et la différenciation épidermique.

Grâce à leur nature tumorigène et à leur capacité à reproduire la biologie cutanée in vitro, les cellules HaCaT-ras II-4 offrent une occasion unique d’explorer les voies moléculaires associées au cancer de la peau et à d’autres troubles cutanés. En utilisant ce modèle cellulaire exceptionnel, les chercheurs peuvent acquérir une compréhension plus approfondie des mécanismes sous-jacents de la tumorigenèse, du potentiel invasif et des interventions thérapeutiques.

Les cellules HaCaT-ras II-4 constituent un outil essentiel pour la recherche en sciences biologiques, plus particulièrement dans le domaine de la biologie cutanée et des études sur la différenciation. Leur origine à partir de kératinocytes cutanés humains immortalisés spontanément, leur modification par l’oncogène c-Ha-ras (EJ) et leur comportement tumorigène subséquent chez la souris en font un outil inestimable pour l’étude des maladies cutanées et des approches thérapeutiques. En tirant parti des caractéristiques uniques des cellules HaCaT-ras II-4, les chercheurs peuvent acquérir une compréhension plus approfondie de la biologie de la peau et contribuer à faire progresser les connaissances médicales ainsi que les options de traitement pour divers troubles cutanés.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Éliminer l'ancien milieu : Retirer l'ancien milieu des flacons.
2. Laver les cellules : Ajouter 3 à 5 ml de PBS (sans calcium ni magnésium) dans les flacons T25, ou 5 à 10 ml dans les flacons T75, pour laver les cellules adhérentes.
3. Ajouter la solution d’EDTA : Recouvrir complètement la couche cellulaire d’une solution d’EDTA à 0,05 % fraîchement préparée — utiliser 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75.
4. Incubation : Incuber les flacons à 37 degrés Celsius pendant 10 minutes.
5. Ajouter la solution de trypsine/EDTA : Après l’incubation, ajoutez une solution de trypsine/EDTA fraîchement préparée (0,05 % de trypsine, 0,025 % d’EDTA) dans les flacons, en veillant à ce que les cellules soient entièrement recouvertes — utilisez 1 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75.
6. Surveiller le détachement : Observer les cellules, qui devraient se détacher en 1 à 2 minutes.
7. Neutraliser la trypsine : Ajouter du milieu de culture cellulaire contenant du FBS pour arrêter l’activité de la trypsine.
8. Transférer les cellules : Verser la suspension cellulaire dans de nouveaux flacons préremplis de milieu de culture frais.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.