B-LCL-CDG1

A B-LCL-CDG1 é uma linhagem celular de linfócitos B transformada pelo EBV, derivada de um paciente diagnosticado com PMM2-CDG, uma doença congênita da glicosilação (CDG). Essa doença metabólica rara decorre de mutações no gene *PMM2*, que codifica a fosfomanomutase 2 (PMM2), uma enzima essencial na via da glicosilação. Mutações no *PMM2* interrompem a síntese de cadeias de oligossacarídeos glicosilados, levando à glicosilação defeituosa de várias glicoproteínas e glicoesfingolipídios nos tecidos e no sangue. A doença é caracterizada por manifestações multissistêmicas, afetando frequentemente as funções neurológicas, hepáticas e endócrinas.

Como uma linhagem celular linfoblastoide transformada pelo EBV, a B-LCL-CDG1 oferece um valioso modelo in vitro para o estudo das consequências moleculares e celulares da deficiência de *PMM2*. Essa linhagem celular pode ser utilizada para investigar defeitos de glicosilação, a atividade enzimática da PMM2 e possíveis intervenções terapêuticas, incluindo correção gênica e suplementação de substratos. A B-LCL-CDG1, juntamente com outras linhagens celulares derivadas de pacientes com CDG, serve como um recurso crucial para compreender a fisiopatologia das CDGs e avaliar novas estratégias de tratamento para essas doenças.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.