Células NIH-3T3: Avanços nos estudos sobre fibroblastos e nas aplicações das células NIH-3T3

A linhagem celular NIH-3T3, estabelecida a partir do tecido de um embrião de camundongo albino suíço com 17 dias de idade em 1962 por Howard Green e George Todaro na Faculdade de Medicina da Universidade de Nova York, tornou-se um recurso fundamental na pesquisa biomédica. Reconhecidas por sua alta receptividade à formação de focos do vírus da leucemia e do vírus do sarcoma, as células NIH-3T3 servem como uma ferramenta essencial para uma infinidade de investigações científicas, incluindo estudos de oncologia viral, análise de expressão gênica e exploração da dinâmica do crescimento celular. A nomenclatura “3T3” reflete o método de cultura celular, denotando um intervalo de “transferência de 3 dias” com uma densidade inicial de semeadura de 3 × 10^5 células, destacando as condições padronizadas sob as quais essas células foram inicialmente cultivadas e expandidas.

Diversas morfologias e aplicações das células NIH-3T3

Uma das características marcantes das células NIH-3T3 é sua adaptabilidade morfológica, que varia significativamente com a confluência da cultura. Em densidades mais baixas, esses fibroblastos apresentam uma estrutura celular solitária em forma de fuso, evoluindo para padrões densos e espiralados à medida que a população atinge a confluência. Com um diâmetro médio de cerca de 18 μm, as células NIH-3T3 oferecem um modelo versátil para estudos aprofundados de biologia celular, abrangendo desde mecanismos de reparo tecidual até as complexas vias de regulação do ciclo celular.

Células NIH-3T3 em alta e baixa confluência.

Informações sobre o cultivo

• Principais detalhes do cultivo:

• Tempo de duplicação da população: Aproximadamente 20 horas.

• Tipo de crescimento: Culturas aderentes.

• Densidade de semeadura: Recomendada: 3 a 4 x 10⁴ células/cm².

• Meio de crescimento: DMEM ou Ham’s F12, suplementado com 5% de FBS e 2,5 mM de L-glutamina.

• Condições de crescimento: Manter a 37 °C em uma incubadora umidificada com 5% de CO₂.

• Armazenamento: Manter a temperaturas abaixo de -195 °C na fase de vapor de nitrogênio líquido.

• Método de congelamento: Use o meio CM-1 ou CM-ACF; empregue um método de congelamento lento (queda de temperatura de 1 °C).

• Protocolo de descongelamento: aquecimento rápido em banho-maria a 37 °C, seguido de centrifugação para remoção do meio de congelamento e, em seguida, ressuspensão no meio de crescimento.

• Nível de biossegurança: O cultivo requer um ambiente de nível 1 de biossegurança.

Camundongo albino suíço em um laboratório.

Prós e contras do uso de células NIH 3T3

Vantagens

• Eficiência de transfecção: Conhecidas por suas altas taxas de transfecção, as células NIH-3T3 são excelentes tanto para estudos de expressão gênica transitória quanto estável, sendo compatíveis com uma variedade de técnicas de transfecção.

• Utilidade como camada alimentadora: Essas células costumam servir como camada alimentadora de suporte para coculturas com células como queratinócitos e células-tronco, graças à liberação de fatores de crescimento que promovem o crescimento das células em cocultura.

• Pesquisa com células-tronco: As células NIH-3T3 são a escolha preferida na pesquisa com células-tronco para induzir a pluripotência sem modificação genética e proporcionar um ambiente propício para a diferenciação das células-tronco.

• Estabilidade da cultura: As células NIH-3T3 são conhecidas por sua estabilidade e baixa frequência de transformação espontânea. No entanto, sob certas condições ou após exposição a oncogenes ou mutagênicos específicos, as células NIH-3T3 podem sofrer transformação espontânea. Essa transformação pode levar à aquisição de propriedades cancerosas, como crescimento descontrolado, perda da inibição de contato e a capacidade de formar tumores quando injetadas em hospedeiros suscetíveis. 

Desvantagens

• Tamanho celular inconsistente: A morfologia alongada, semelhante a um fuso, das células NIH-3T3 pode variar, complicando as análises de imagem em ensaios.

• Suscetibilidade a infecções: Essas células são propensas a infecções bacterianas e por micoplasmas se não forem mantidas em condições assépticas rigorosas, o que pode comprometer a integridade experimental.

Aplicações de pesquisa das células NIH-3T3

• Estudos de transfecção de DNA: A robustez das células NIH-3T3 as torna ideais para a introdução e o estudo da função de vários genes, conforme demonstrado em pesquisas que examinam proteínas como NAB2-STAT6 e seus papéis nos processos celulares.

• Ensaios baseados em células: Sua confiabilidade se estende a diversos ensaios, incluindo ensaios de viabilidade, apoptose e formação de focos, oferecendo insights sobre as respostas celulares sob diferentes condições experimentais.

• Pesquisa do ciclo celular: A facilidade de manipulação do ciclo celular dessa linhagem celular por meio dos níveis de soro a torna um modelo potente para o estudo da regulação do ciclo celular e de suas aberrações em contextos de doenças.

Eleve o nível de sua pesquisa com células NIH-3T3

Destacando os principais estudos envolvendo a linhagem celular de fibroblastos NIH 3T3 

A linhagem celular NIH-3T3 tem sido fundamental em inúmeros projetos de pesquisa, abrangendo diversas facetas da biologia celular. Abaixo estão alguns estudos significativos que utilizam essas células:

• Explorando a proteína de fusão NAB2-STAT6: Publicado na revista *Biochemical and Biophysical Research Communications*, este estudo investiga como a proteína de fusão NAB2-STAT6 afeta as células NIH-3T3, especificamente seu papel no aumento do crescimento e da migração celular por meio da regulação do EGR-1.
• Investigando a APOBEC3 e o vírus da leucemia murina: Esta pesquisa, publicada na revista *Virology*, examina a hipermutação do vírus da leucemia murina AKV em células NIH-3T3 que expressam o gene APOBEC3 de camundongo.
• Avaliação do potencial antimetastático de medicamentos epigenéticos: Na revista *Oncotargets and Therapy*, este estudo avalia os efeitos antimetastáticos da hidralazina e do ácido valpróico em células NIH-3T3 transformadas por RAS.
• Impacto da baicaleína na proliferação de NIH-3T3 e na síntese de colágeno: Esta pesquisa utiliza células NIH-3T3 para explorar como a baicaleína influencia a proliferação celular e a produção de colágeno por meio da modulação do eixo miR-9/fator de crescimento semelhante à insulina-1.
• Estudo da deficiência de riboflavina e da tumorigênese: Este estudo apresenta descobertas sobre como a deficiência de riboflavina nas células NIH-3T3 contribui para a tumorigênese, promovendo a proliferação celular e desregulando genes do ciclo celular.

Recursos essenciais para pesquisas com células NIH-3T3

Para pesquisadores interessados em trabalhar com células NIH-3T3, há uma variedade de recursos disponíveis para orientar os protocolos de cultura e experimentais:

• Formação de esferóides em células NIH-3T3: Este vídeo oferece um passo a passo detalhado da formação de esferóides, uma técnica de cultura celular 3D que agrega células NIH-3T3 em aglomerados, proporcionando um modelo mais relevante do ponto de vista fisiológico para os estudos.
• Monitoramento do crescimento das células NIH-3T3: Por meio do sistema de imagem de células vivas JuLI Br, este vídeo captura a dinâmica de crescimento das células NIH-3T3 ao longo de 65 horas, mostrando a proliferação celular em tempo real.

Esses recursos têm como objetivo apoiar seus esforços de pesquisa com células NIH-3T3, fornecendo uma base para experimentos e descobertas bem-sucedidos.

Referências

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