Премини към съдържанието
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP
Тъкан
Ендоцервикс
Заболяване
Аденокарцином
Място на метастазите
Място на първичния тумор (ендоцервикс)
Синоними
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16, HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

Документи

HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP

Cell line · Номер на продукта 301573

Клетъчната линия HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP е генетично модифицирана за напреднали клетъчни изследвания. Тя е получена от клетки Hela Kyoto и използва технологията CRISPR/Cas9...

€800.00без ДДС и доставка

Персонализиране / Препоръки

На склад
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP е генетично разработена за напреднали клетъчни изследвания. Произведена от клетки Hela Kyoto, тя използва технологията CRISPR/Cas9 за маркиране на гена CAP-D3 с мономерен подобрен зелен флуоресцентен протеин (mEGFP). CAP-D3 е от решаващо значение за хромозомната организация и сегрегация по време на клетъчното делене. Тагът mEGFP позволява визуализиране на динамиката на CAP-D3 в реално време.

Тази клетъчна линия е ценен инструмент за изучаване на хромозомната стабилност и цялост, особено при заболявания като рак. Флуоресцентният маркер позволява изобразяване на живи клетки с висока разделителна способност и подробен анализ на CAP-D3 по време на клетъчния цикъл. Изследователите могат да използват този модел за изследвания на локализацията на протеини и анализи на молекулярни взаимодействия.

Тъкан
Ендоцервикс
Заболяване
Аденокарцином
Място на метастазите
Място на първичния тумор (ендоцервикс)
Приложения
Биология на комплекса „Кондензин II“; визуализация на субединицата CAP-D3; организация и сегрегация на хромозомите; митотична динамика; визуализация на живи клетки; флуоресцентна микроскопия с висока разделителна способност; валидиране на CRISPR-knock-in
Синоними
  • HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16
  • HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Женски
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Статус на ГМО
GMO-S1
Подробности относно статуса на ГМО
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP insertion at the CAP-D3 locus for condensin studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Епителиални клетки с форма на мозаечно камъче
Тип клетка
Епителни клетки

04Идентификатори

Източник
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP (каталожен номер 301573 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_UR44
Вложител
Лабораторията на Елънбърг (EMBL)

05Проява и предразположеност

Продукти
EGFP (подобрен зелен флуоресцентен протеин)

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
DMEM, w: 4,5 g/L глюкоза, w: 4 mM L-глутамин, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM натриев пируват (номер на изделието на Cytion 820300a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
30 години
Етническа принадлежност
Афроамериканец