Mine otse sisu juurde
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP
Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Sünonüümid
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16, HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

Dokumendid

HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP

Cell line · Toote number 301573

Rakuliin HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP on geneetiliselt muundatud edasijõudnud rakuteaduslikuks uurimistööks. See on saadud Hela Kyoto rakkudest ja selles kasutatakse CRISPR/Cas9 tehnoloogiat...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP rakuliin on geneetiliselt muundatud täiustatud raku-uuringute jaoks. See on saadud Hela Kyoto rakkudest ja kasutab CRISPR/Cas9 tehnoloogiat, et märgistada CAP-D3 geeni monomeerse tõhustatud rohelise fluorestseeruva valguga (mEGFP). CAP-D3 on oluline kromosoomide organiseerimiseks ja segregatsiooniks rakkude jagunemise ajal. MEGFP-märgis võimaldab CAP-D3 dünaamika visualiseerimist reaalajas.

See rakuliin on väärtuslik vahend kromosoomide stabiilsuse ja terviklikkuse uurimiseks, eriti selliste haiguste puhul nagu vähk. Fluorestseeruv märgistus võimaldab kõrgresolutsiooniga elava raku pildistamist ja CAP-D3 üksikasjalikku analüüsi rakutsükli ajal. Teadlased saavad seda mudelit kasutada valkude lokaliseerimise uuringuteks ja molekulaarse koostoime analüüsideks.

Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Rakendused
Kondensiin II kompleksi bioloogia; CAP-D3 alarühma pildistamine; kromosoomide korraldus ja segregeerumine; mitootiline dünaamika; elusrakkude pildistamine; kõrglahutusega fluorestsentsmikroskoopia; CRISPR-knock-in-meetodi valideerimine
Sünonüümid
  • HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16
  • HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP insertion at the CAP-D3 locus for condensin studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed rakud, millel on mosaiikne kivikuju
Rakutüüp
Epiteelirakud

04Tunnused

Viide
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP (Cytioni katalooginumber 301573)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_UR44
Hoiustaja
Ellenbergi labor (EMBL)

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Tooted
EGFP (tõhustatud roheline fluorestseeruv valk)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
30 aastat
Etniline kuuluvus
Afroameeriklane