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HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP
Pañuelo de papel
Endocervix
Enfermedad
Adenocarcinoma
Lugar de metástasis
Localización del tumor primario (endocérvix)
Sinónimos
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16, HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

Documentos

HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP

Cell line · Número de producto 301573

La línea celular HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP ha sido modificada genéticamente para la investigación celular avanzada. Derivada de las células Hela Kyoto, utiliza la tecnología CRISPR/Cas9...

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01Información general

Descripción

La línea celular HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP está diseñada genéticamente para la investigación celular avanzada. Derivada de células Hela Kyoto, utiliza la tecnología CRISPR/Cas9 para marcar el gen CAP-D3 con proteína verde fluorescente monomérica mejorada (mEGFP). CAP-D3 es crucial para la organización cromosómica y la segregación durante la división celular. La etiqueta mEGFP permite visualizar en tiempo real la dinámica de CAP-D3.

Esta línea celular es una valiosa herramienta para el estudio de la estabilidad e integridad cromosómica, especialmente en enfermedades como el cáncer. La etiqueta fluorescente permite la obtención de imágenes de alta resolución de células vivas y el análisis detallado de CAP-D3 durante el ciclo celular. Los investigadores pueden utilizar este modelo para estudios de localización de proteínas y ensayos de interacción molecular.

Pañuelo de papel
Endocervix
Enfermedad
Adenocarcinoma
Lugar de metástasis
Localización del tumor primario (endocérvix)
Aplicaciones
Biología del complejo condensina II; obtención de imágenes de la subunidad CAP-D3; organización y segregación cromosómica; dinámica mitótica; obtención de imágenes de células vivas; microscopía de fluorescencia de alta resolución; validación de knock-in mediante CRISPR
Sinónimos
  • HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16
  • HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Mujer
Propiedades de crecimiento
Adherente
Situación respecto a los OMG
GMO-S1
Detalles sobre la presencia de OMG
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP insertion at the CAP-D3 locus for condensin studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
Células de aspecto epitelial con forma de piedra en mosaico
Tipo de célula
Células epiteliales

04Identificadores

Referencia
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP (número de catálogo de Cytion 301573)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_UR44
Depositario
Laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Expresión y susceptibilidad

Productos
EGFP (proteína fluorescente verde mejorada)

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
DMEM, w: 4,5 g/L de glucosa, w: 4 mM de L-glutamina, w: 3,7 g/L de NaHCO3, w: 1,0 mM de piruvato sódico (número de artículo de Cytion 820300a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Complementar el medio con un 10% de FBS
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
30 años
Origen étnico
Afroamericanos