Pāriet uz saturu
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP
Audums
Endocervix
Slimība
Adenokarcinoma
Metastāžu vieta
Primārā audzēja lokalizācija (endocervix)
Sinonīmi
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16, HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

Dokumenti

HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP

Cell line · Preces numurs 301573

Šūnu līnija HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP ir ģenētiski modificēta, lai veiktu padziļinātus šūnu pētījumus. Tā ir atvasināta no Hela Kyoto šūnām, un tajā tiek izmantota CRISPR/Cas9 tehnoloģija...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP šūnu līnija ir ģenētiski izstrādāta moderniem šūnu pētījumiem. Tā iegūta no Hela Kyoto šūnām, izmantojot CRISPR/Cas9 tehnoloģiju, lai marķētu CAP-D3 gēnu ar monomēru uzlaboto zaļo fluorescējošo proteīnu (mEGFP). CAP-D3 ir ļoti svarīgs hromosomu organizācijai un segregācijai šūnu dalīšanās laikā. MEGFP marķējums ļauj reāllaikā vizualizēt CAP-D3 dinamiku.

Šī šūnu līnija ir vērtīgs rīks hromosomu stabilitātes un integritātes izpētei, jo īpaši tādu slimību gadījumā kā vēzis. Fluorescējošais marķējums ļauj veikt augstas izšķirtspējas dzīvās šūnas attēlveidošanu un detalizētu CAP-D3 analīzi šūnu cikla laikā. Pētnieki var izmantot šo modeli proteīnu lokalizācijas pētījumiem un molekulārās mijiedarbības analīzēm.

Audums
Endocervix
Slimība
Adenokarcinoma
Metastāžu vieta
Primārā audzēja lokalizācija (endocervix)
Pieteikumi
Condensin II kompleksa bioloģija; CAP-D3 apakšvienības attēlveidošana; hromosomu organizācija un segregācija; mitotiskā dinamika; dzīvo šūnu attēlveidošana; augstas izšķirtspējas fluorescences mikroskopija; CRISPR „knock-in” validācija
Sinonīmi
  • HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP #16
  • HK CRISPR CAP-D3-mEGFP

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP insertion at the CAP-D3 locus for condensin studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgas šūnas ar mozaīkveida akmens formu
Šūnu tips
Epitēlija šūnas

04Identifikatori

Atsauce
HK-CRISPR-CAP-D3-mEGFP (Cytion kataloga numurs 301573)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_UR44
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

05Pazīmes un uzņēmība

Produkti
EGFP (uzlabots zaļais fluorescējošais proteīns)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
30 gadi
Etniskā piederība
Afroamerikānis