La línea celular RAW 264.7 en la investigación sobre macrófagos e inmunología

La línea celular RAW 264.7 constituye un modelo in vitro robusto de los macrófagos murinos, fundamental en el ámbito de la investigación inmunológica. Procedentes de un ratón BALB/c macho, estas células fueron transformadas por el virus de la leucemia murina de Abelson, lo que dio lugar a una línea celular de tipo macrófago. Debido a su estabilidad funcional y a su capacidad inherente para realizar tanto la fagocitosis como la pinocitosis, las células RAW 264.7 son esenciales para el estudio de las interacciones entre el huésped y el patógeno, lo que las convierte en una piedra angular de los esfuerzos de investigación inmunológica [1,2].

Características morfológicas y comportamiento de crecimiento

Tras su examen, las células RAW 264.7 presentan un crecimiento semiadherente con tendencia a formar tanto células adherentes de forma fusiforme como células viables esféricas flotantes, con un diámetro celular que oscila entre 10 y 20 µm. Esta naturaleza polimórfica y su adaptabilidad a las condiciones de cultivo convierten a las células RAW 264.7 en una herramienta versátil para la manipulación y la observación experimentales.

Función inmunológica y presentación de antígenos

Como células presentadoras de antígenos, las células RAW 264.7 desempeñan un papel fundamental en el sistema inmunitario. Su función va más allá del simple reconocimiento de patógenos y abarca el procesamiento y la presentación de antígenos a las células T, coordinando así una respuesta inmunitaria integral. Esta dinámica facilita una comprensión más profunda de cómo el sistema inmunitario identifica y neutraliza las entidades extrañas.

Polarización de los macrófagos: el paradigma M0, M1 y M2

Las células RAW 264.7, en su estado basal como macrófagos M0, poseen la notable capacidad de polarizarse hacia el fenotipo proinflamatorio M1 o hacia el antiinflamatorio M2. Esta capacidad de polarización proporciona a los investigadores un modelo para estudiar las influencias y los efectos de diversas citocinas y factores ambientales sobre la función de los macrófagos y las respuestas inmunitarias [3,4].

Osteoclastogénesis y remodelación ósea

Aunque no son osteoclastos propiamente dichos, las células RAW 264.7 han resultado fundamentales para estudiar la osteoclastogénesis, es decir, el proceso de formación de los osteoclastos. Estas células facilitan la investigación de la expresión génica osteoclástica y su capacidad de respuesta a la activación de los receptores. Esta investigación tiene profundas implicaciones para comprender la fisiopatología de afecciones como la osteoporosis, en la que la desregulación de la remodelación ósea es un rasgo característico.

Información sobre el cultivo celular de RAW 264.7

Antes de comenzar tus experimentos, debes conocer algunos datos básicos sobre esta potente línea celular. ¿Sabes cuál es el tiempo de duplicación de las células RAW 264.7? ¿Cuál es la densidad de siembra de estas células? ¿Son adherentes? Además, ¿cuáles son las condiciones óptimas de crecimiento para la línea celular RAW 264.7? ¡Sigue leyendo para descubrir todas las respuestas que necesitas para trabajar con esta increíble línea celular!

Información sobre el cultivo celular

Línea celular RAW 264.7

Tiempo de duplicación de la población

De 11 a 30 horas

Adherentes o en suspensión

Predominantemente adherente, con algunas poblaciones de células en suspensión

Densidad de siembra

4 × 10⁴ células/cm²

Medio de cultivo recomendado

RPMI 1640 suplementado con un 10 % de suero fetal bovino y L-glutamina (2,5 mM)

Condiciones óptimas de cultivo

Incubadora humidificada con un 5 % de CO₂ y una temperatura de 37 °C

Sustitución del medio

De 2 a 3 veces por semana

Almacenamiento

Fase gaseosa de nitrógeno líquido

Medio de congelación

CM-1 o CM-ACF

Proceso de congelación

Congelación lenta

Proceso de descongelación

Agitación rápida en un baño de agua a 37 °C

Nivel de bioseguridad

Se recomienda un laboratorio de nivel BSL-2

Macrófagos murinos RAW 264.7 con diferentes grados de confluencia.

Ventajas y desventajas de las células RAW 264.7

Ventajas

• Fácil cultivo: La línea celular RAW 264.7 es fácil de cultivar y mantener en el laboratorio sin requisitos complicados.
• Bien caracterizada: La RAW 264.7 es una línea celular bien caracterizada, lo que significa que presenta características fenotípicas y funcionales estables.
• Modelo in vitro de macrófagos: dado que las células RAW 264.7 son macrófagos, presentan funciones esenciales propias de los macrófagos, como la fagocitosis y la pinocitosis. Por ello, se utilizan a menudo como modelo in vitro de macrófagos.
• Diferenciación en osteoclastos: Las células RAW 264.7 pueden diferenciarse en osteoclastos mediante factores moleculares específicos. Estas células diferenciadas son capaces de llevar a cabo la remodelación ósea, de forma similar a los osteoclastos.

Desventajas

• Escasa representación de los macrófagos primarios: al tratarse de una línea celular transformada, es posible que las células RAW 264.7 no representen con exactitud las características de los macrófagos primarios y que presenten algunas diferencias en la expresión génica, el fenotipo y la función.
• Limitaciones en el cribado de fármacos: es posible que las células RAW 264.7 no sean adecuadas para todos los tipos de ensayos de cribado de fármacos, y sus respuestas a algunos fármacos pueden diferir de las de los macrófagos primarios.
• Fuerte adhesión celular: Las células RAW 264.7 se adhieren fuertemente a la superficie del frasco de cultivo y, en ocasiones, puede resultar complicado desprendérselas.

Aplicaciones de las células RAW 264.7 en la simulación de macrófagos y en estudios inmunológicos

Modelización de respuestas inmunológicas celulares

La línea celular RAW 264.7, que refleja las funcionalidades de los macrófagos auténticos, es un modelo clave para la investigación de las respuestas celulares a patógenos y estímulos inmunológicos. Un estudio que destaca este aspecto evaluó los efectos inmunomoduladores y antioxidantes de las bacterias del ácido láctico inactivadas por calor en estas células, lo que aportó hallazgos significativos sobre la regulación del sistema inmunitario [5 ].

Como complemento a esto, una investigación realizada en 2019 dilucidó el impacto inmunológico de la exposición de las células RAW 264.7 a polisacáridos de la planta Polygonatum sibiricum. El estudio concluyó que estos compuestos desencadenan una respuesta inmunitaria mediante la activación de las vías de señalización NF-κB/MAPK, lo que ofrece una comprensión molecular profunda [6].

Investigación sobre la osteoclastogénesis

Las células RAW 264.7, que actúan como modelo para los estudios de diferenciación de los osteoclastos, contribuyen a esclarecer el comportamiento de los osteoclastos y sus vías de diferenciación. Este tipo de investigación amplía nuestro conocimiento sobre los mecanismos de resorción ósea y la patogénesis de la osteoporosis. A menudo se utilizan técnicas avanzadas de imagen para monitorizar los cambios intracelulares y analizar el metabolismo del hemo en estas células.

Obtención de conocimientos moleculares sobre la osteoclastogénesis

A pesar de su función principal como modelo de macrófagos, las células RAW 264.7 también se emplean para la investigación in vitro sobre la osteoclastogénesis. Al inducir características similares a las de los osteoclastos en estas células, los investigadores obtienen información sobre el proceso de diferenciación y el comportamiento de los preosteoclastos, aunque en estos estudios es fundamental tener en cuenta las características inherentes y el origen de la línea celular.

Cribado de la bioactividad de productos naturales

El cribado de la bioactividad en productos naturales es otra aplicación en la que las células RAW 264.7 destacan. Por ejemplo, su uso en un estudio coreano que investigaba las propiedades inmunoestimulantes de una mezcla de hierbas puso de manifiesto la eficacia de esta línea celular a la hora de identificar compuestos bioactivos en sustancias naturales [7 ].

Sé pionero en tu investigación con nuestras células RAW 264.7

Publicaciones de investigación en las que se utilizan células RAW 264.7

Existen numerosas publicaciones de investigación sobre la línea celular de macrófagos de ratón RAW 264.7:

• Los polisacáridos de Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute inducen una respuesta inmunitaria en la línea celular RAW 264.7 a través de la vía NF-κB/MAPK: Este estudio propuso que los polisacáridos obtenidos de la planta Polygonatum sibiricum pueden desencadenar una respuesta inmunitaria en la línea celular de macrófagos de ratón RAW 264.7 mediante la regulación de la cascada de señalización NF-κB/MAPK.
• Efectos inmunomoduladores del extracto de Tinospora crispa y sus compuestos principales sobre las funciones inmunitarias de los macrófagos RAW 264.7: Este artículo, publicado en la revista International Immunopharmacology, describe que el extracto de la planta Tinospora crispa y sus principales componentes tienen un efecto inmunomodulador e inmunoestimulador sobre la línea celular de macrófagos RAW 264.7.
• Las bacterias del ácido láctico inactivadas por calor inhiben la producción de óxido nítrico a través de la óxido nítrico sintasa inducible y la ciclooxigenasa-2 en las células RAW 264.7: Este estudio propone que las bacterias del ácido láctico inactivadas por calor podrían utilizarse en la síntesis de productos probióticos, ya que poseen propiedades inmunomoduladoras y antioxidantes. Los investigadores utilizaron células RAW 264.7 para estudiar estas actividades biológicas.
• Efecto de una formulación a base de hierbas sobre la potenciación de la respuesta inmunitaria en los macrófagos RAW 264.7: Este estudio utilizó células RAW 264.7 para analizar el efecto inmunoestimulante de una formulación a base de hierbas denominada KM1608. El estudio sugirió que la KM1608 podría ser un agente potenciador de la respuesta inmunitaria.
• Un análisis de las plantas utilizadas en la medicina tradicional colombiana reveló el potencial antiinflamatorio de los cálices de Physalis angulata: este artículo, publicado en el Saudi Journal of Biological Sciences, investigó el potencial antiinflamatorio de diez plantas tradicionales colombianas de uso común utilizando células RAW 264.7 estimuladas con LPS.

Células RAW 264.7: recursos, protocolos, vídeos y más

Las células RAW 264.7 se utilizan a menudo en estudios de transfección. Los siguientes recursos explican los diferentes métodos de transfección utilizados para la línea celular RAW 264.7.

• Transfección de células RAW 264.7: esta página web ofrece un protocolo para la transfección de macrófagos RAW 264.7 utilizando un reactivo de lipofectamina.
• Protocolo de transfección: este artículo publicado describe un protocolo detallado para la transfección de células RAW 264.7.
• Método eficaz de transfección para las células RAW 264.7: Este documento describe otro enfoque práctico de transfección con células RAW 264.7.

Vídeos relacionados con la línea celular RAW 264.7

• Cultivo de células RAW 264.7: Este vídeo explica el protocolo de pases de las células RAW 264.7.
• Método de transfección: Este vídeo trata sobre la transfección de células RAW 264.7 con un gen reportero.

Preguntas frecuentes esenciales sobre la línea celular RAW 264.7: información sobre la investigación en mimetismo de macrófagos y osteoclastogénesis

Referencias

1. Taciak, B., et al., «Evaluación de la estabilidad fenotípica y funcional de la línea celular RAW 264.7 mediante pases sucesivos». PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
2. Wang, S., et al., «Los macrófagos inflamatorios interrumpen la maduración y la mineralización de los osteocitos mediante la regulación de la vía de señalización Notch». Molecular Medicine, 2022. 28(1): p. 102.
3. Orekhov, A.N., et al., «Diferenciación de monocitos y polarización de macrófagos». *Vessel Plus*, 2019. 3: p. 10.
4. Khabipov, A., et al., «Polarización de los macrófagos RAW 264.7 por las células de cáncer de páncreas: un modelo para el estudio de los macrófagos promotores de tumores». Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
5. Kang, C.-H., et al., Las bacterias del ácido láctico inactivadas por calor inhiben la producción de óxido nítrico a través de la óxido nítrico sintasa inducible y la ciclooxigenasa-2 en las células RAW 264.7. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
6. Zhang, J., et al., Los polisacáridos de Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute inducen una respuesta inmunitaria en la línea celular RAW264.7 a través de la vía NF-κB/MAPK. RSC Advances, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
7. Trinh, T.A., et al., Efecto de una formulación a base de hierbas sobre la potenciación de la respuesta inmunitaria en los macrófagos RAW 264.7. Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.