Siirry sisältöön
WT-CLS1
Kudos
Munuaiset
Sairaus
Rabdoidikasvain
Synonyymit
CLS1

Asiakirjat

WT-CLS1

Cell line · Tuotenumero 300379

CLS perusti WT-CLS1-solulinjan primaarisesta Wilmsin kasvaimesta vuonna 1998. Soluilla on kuitenkin rabdoidisia piirteitä, kuten E. Kun on osoittanut...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
WT-CLS1-solulinja perustettiin CLS:llä vuonna 1998 Wilmsin primaarisesta kasvaimesta. Soluilla on kuitenkin rabdoidisia piirteitä, kuten E. Kunce Stroup ym. osoittivat vuonna 2017. WT-CLS1-solut ovat herkkiä miR-16:lle, minkä seurauksena sykliini D -geenien ilmentyminen vähenee. Lisäksi solut osoittivat ainutlaatuista vastustuskykyä IGF1R:n estolle, toisin kuin aidot Wilmin kasvainsolut.
Kudos
Munuaiset
Sairaus
Rabdoidikasvain
Synonyymit
  • CLS1

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
B-lymfoblasti
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä. Muodostaa kasvaimen, jossa on pieniä soluja, jotka vastaavat Wilmsin kasvainta (ks. E. Kunce Stroup 2017)

04Tunnisteet

Lähdeviite
WT-CLS1 (Cytionin luettelonumero 300379)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_5904

05Ilmentyminen ja alttius

Mutaatioprofiili
WT1-mutaation status: villi tyyppi, CTNNB1-mutaation status: villi tyyppi, ei LOH.
Virukset
HIV-1: negatiivinen, HBV: negatiivinen, HCV: negatiivinen

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
IMDM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 25 mM HEPES, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia, w: 3,024 g/l NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820800a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1–3 x 105 solua/cm2
Nesteen uusiminen
3-4 päivän välein
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
5 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen