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B-LCL-HROC103
Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
Bc HROC103

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B-LCL-HROC103

Cell line · Codice prodotto 302020

B-LCL-HROC103 è una linea cellulare linfoblastoide B umana immortalizzata dal virus di Epstein-Barr (EBV), ottenuta da linfociti B isolati da tessuto tumorale...

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01Informazioni generali

Descrizione

B-LCL-HROC103 è una linea cellulare linfoblastoide B umana immortalizzata dal virus di Epstein-Barr (EBV) ottenuta da linfociti B isolati dal tessuto tumorale o dal sangue periferico di un paziente adulto. Le cellule sono state generate mediante infezione ex vivo con supernatante contenente EBV derivato dalla linea cellulare B95/8 di marmoset in presenza di ciclosporina A per sopprimere la crescita delle cellule T e NK. Dopo diverse settimane di coltura, è stata ottenuta una crescita linfoblastica stabile, che ha portato a una popolazione di cellule B monoclonali o oligoclonali in continua proliferazione, adatta all'espansione in vitro a lungo termine.

Dal punto di vista immunofenotipico, B-LCL-HROC103 presenta un profilo di cellule B mature e attivate caratterizzato dall'espressione di CD19 e CD20, insieme ad alti livelli di marcatori di attivazione e maturazione come CD23 e CD80. La forte espressione delle molecole MHC di classe I e II indica una capacità di presentazione dell'antigene preservata. A seconda del singolo clone, è possibile osservare un'espressione variabile di marcatori associati alla differenziazione quali CD27, CD38 o CD138, che riflettono diversi stadi di maturazione delle cellule B. Le cellule sono negative ai marcatori delle cellule T, a conferma della specificità della linea cellulare.

Dal punto di vista funzionale, B-LCL-[MODELLO NOME] secerne immunoglobuline di un isotipo definito (ad esempio IgG, IgM o IgA), che rimangono stabili durante la coltura prolungata. Gli anticorpi secreti possono essere raccolti dai supernatanti di coltura e utilizzati per applicazioni a valle, tra cui test di legame dell'antigene, studi di riconoscimento delle cellule tumorali o identificazione di antigeni associati alla malattia. Come modello di cellule B immortalizzate dall'EBV, B-LCL-HROC103 fornisce una solida piattaforma in vitro per lo studio delle risposte immunitarie umorali, dell'attivazione e della differenziazione delle cellule B e dei meccanismi mediati dagli anticorpi nel contesto dell'immunologia tumorale o delle risposte immunitarie sistemiche.

Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • Bc HROC103

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Celle rotonde
Tipo di cellula
Linfoblasto B

04Identificatori

Riferimento bibliografico
B-LCL-HROC103 (numero di catalogo Cytion 302020)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FE

05Espressione e suscettibilità

Antigeni di superficie
CD19
Virus
Trasformante: EBV

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS inattivato termicamente
Subcoltura
Omogeneizzare delicatamente la sospensione cellulare nel pallone pipettando verso l'alto e verso il basso, quindi prelevare un campione rappresentativo per determinare la densità cellulare per ml. Diluire la sospensione per ottenere una concentrazione cellulare di 1 x 105 cellule/ml con terreno di coltura fresco e aliquotare la sospensione regolata in nuovi palloni per l'ulteriore coltivazione.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Età non specificata
Etnia
Caucasico