Pāriet uz saturu
B-LCL-CDG3
Audums
Perifērās asinis
Slimība
Iedzimti glikozilēšanas traucējumi
Metastāžu vieta
Neattiecas (EBV transformētas B-LCL; bez metastāzēm)

Dokumenti

B-LCL-CDG3

Cell line · Preces numurs 302014

B-LCL-CDG3 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a patient with PMM2-CDG, a congenital disorder of glycosylation (CDG) caused by mutat...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

B-LCL-CDG3 ir ar EBV transformēta B limfocītu šūnu līnija, kas iegūta no pacienta ar PMM2-CDG - iedzimtu glikozilēšanas traucējumu (CDG), ko izraisa mutācijas *PMM2* gēnā. PMM2 kodē fosfomannomutāzi 2, kas ir N-glikozilēšanas ceļa galvenais enzīms, kurš atbild par mannozes-6-fosfāta pārvēršanu mannozes-1-fosfātā. PMM2 trūkuma dēļ ir traucēta daudzu glikoproteīnu un glikolipīdu glikozilēšana, kas izraisa plašu klīnisko izpausmju spektru, tostarp neiroloģisku, aknu un endokrīnu disfunkciju.

B-LCL-CDG3 kā EBV imortalizēta B šūnu līnija kalpo kā vērtīgs in vitro modelis *PMM2* mutāciju molekulārās ietekmes izpētei. Šo šūnu līniju var izmantot, lai analizētu glikozilēšanas defektus, pētītu PMM2 enzīma aktivitāti un pārbaudītu potenciālās terapeitiskās stratēģijas, piemēram, enzīma pastiprināšanas terapiju vai substrāta papildināšanu. B-LCL-CDG3 kopā ar citiem no CDG pacientiem atvasinātiem šūnu modeļiem veicina CDG patofizioloģijas un ārstēšanas attīstības pētījumus.

Audums
Perifērās asinis
Slimība
Iedzimti glikozilēšanas traucējumi
Metastāžu vieta
Neattiecas (EBV transformētas B-LCL; bez metastāzēm)
Pieteikumi
CDG iedarbības genotipa noteikšana imūnšūnās, funkcionālā testēšana (piemēram, B šūnu virsmas antigēni), citotoksisko zāļu testēšana. Mutaciju analīze, apoptozes mehānismu analīze, HLA tipa noteikšana, dažādu šūnu glikoproteīnu defektas glikozilēšanas ietekme uz dažādām funkcijām.

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atsperes
ĢMO statuss
GMO-S2
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S2: This B-LCL contains a stably maintained EBV episome encoding viral latent-phase genes (EBNA-1/-2/-3, LMP-1/-2). EBV is classified as a risk group 2 pathogen; BSL-2 containment required. This classification applies within Germany; regulations may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
2

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Apaļas šūnas
Šūnu tips
B limfocīts

04Identifikatori

Atsauce
B-LCL-CDG3 (Cytion kataloga numurs 302014)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
Not assigned

05Pazīmes un uzņēmība

Vīrusi
Transformants: EBV

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% termiski inaktivētu FBS
Pārstādīšana
Kultūras uzturiet, periodiski pievienojot vai nomainot barotni. Kultūras uzsāciet ar blīvumu 2 x 105 šūnas/ml un uzturiet šūnu koncentrāciju diapazonā no 1 x 105 līdz 5 x 105 šūnas/ml, lai nodrošinātu optimālu augšanu.
Šķidruma atjaunošana
Kad vidējā krāsa kļuva dzeltena
Atgūšanās pēc atkusņa
Vidēja
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Etniskā piederība
Kaukāzietis