
- Tissue
- כליה
- Synonyms
- Llc-Mk2, LLC-MK-2, LLC-MK2 Original, LLCMK2, LLcMK2, Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2
Documents
01General information
- Description
LLC-MK2 הוא קו תאים אפיתל רציף שהוקם מרקמת הכליה של קופי רזוס בוגרים (*Macaca mulatta*). קו תאים זה בודד במקור בשנות ה-50 של המאה הקודמת באמצעות טריפסין של רקמת כליה מאוחדת מששה קופי רזוס. תאי LLC-MK2 מציגים מאפייני צמיחה דבקים ושימשו רבות בווירולוגיה בשל רגישותם הגבוהה לנגיפים שונים, כולל נגיף שלשול ויראלי בקר 1, נגיף פוליו אנושי 1 ונגיף קוקסאקי B4 אנושי. מקור קו התאים ורגישותו לנגיפים הופכים אותו למודל אידיאלי לחקר שכפול נגיפי והשפעות ציטופתוגניות.
קו התאים LLC-MK2 ידוע ביכולתו להיות מתורבת במדיום כימי מוגדר, נטול סרום, המאפשר תנאי ניסוי מבוקרים. מחקרים הוכיחו שתאים אלה יכולים להיות מותאמים לתנאים נטולי סרום מבלי לפגוע בצמיחה, למרות שתרבויות ראשוניות נשמרו במדיום המכיל כמויות משמעותיות של סרום סוסים. ההתאמה למדיום כימי מוגדר היא יתרון משמעותי למחקרים וירולוגיים, מכיוון שהיא ממזערת את השונות הנגרמת על ידי הסרום ותומכת בתחזוקה ארוכת טווח של קו התאים. בנוסף, קו התאים LLC-MK2 הוכח כבעל רגישות לנגיפים הדומה לזו של תאי כליה ראשוניים של קופים, מה שהופך אותו לכלי אמין למחקרים על טיטרציה נגיפית וייצור חיסונים.
בנוסף לתפקידו בווירולוגיה, נחקר גם הפוטנציאל הטומורגני של LLC-MK2. למרות שהוא מפגין מאפיינים מסוימים של שינוי, כגון היכולת לגדול באגר רך, הוא אינו יוצר גידולים במודלים in vivo, מה שמצביע על סיכון טומורגני מוגבל. מאפיין זה מדגיש עוד יותר את השימושיות שלו כקו תאים מודל למחקרים in vitro, תוך אישור אי-התאמתו ליישומים טיפוליים או in vivo.
- Tissue
- כליה
- Synonyms
- Llc-Mk2
- LLC-MK-2
- LLC-MK2 Original
- LLCMK2
- LLcMK2
- Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2
02Classification
- Organism
- Rhesus macaque
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- אפיתל
04Identifiers
- Citation
- LLC-MK2 (מספר קטלוג של Cytion: 305149)
- NCBI TaxID
- 9544
- Cellosaurus
- CVCL_3009
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- מפעיל פלסמינוגן
06Handling and culture
- Culture medium
- מדיום 199, w: 2.7 mM גלוטמין יציב, w: 2.2 g/L NaHCO3, w: EBSS (מספר קטלוגי Cytion 820101a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, אווירה לחה.
- Supplements
- הוסף לתווך 1% סרום סוסים
- Dissociation reagent
- אקוטאז
- Subculturing
- הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
- Seeding density
- 4 x 104 תאים/סמ"ר
- Fluid renewal
- 2 עד 3 פעמים בשבוע
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.
כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
- Freeze medium
- כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
- Storage conditions
לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.
- Shipping conditions
שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
08Donor
- Donor age
- מבוגר
09Legal and safety
- Safety precautions
- כאשר מתכננים לאחסן קריוביאל בחנקן נוזלי להפשרה עתידית, חובה להקפיד על אמצעי בטיחות מחמירים. יש להקפיד על שימוש בכפפות ובבגדים מגנים מתאימים, וכן על שימוש במסכת פנים או משקפי מגן בעת העברת דגימות קפואות אל מיכל החנקן הנוזלי או ממנו. זאת כדי להפחית את הסיכון לפציעה כתוצאה מפיצוץ אפשרי של הקריוביאל בעת הוצאתו, העלול לגרום להתזת רסיסים חדים.
- Warranty
ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.
לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו
- Material Transfer Agreement required
- Yes