Skip to content
LLC-MK2
Tissue
Thận
Synonyms
Llc-Mk2, LLC-MK-2, LLC-MK2 Original, LLCMK2, LLcMK2, Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

Documents

LLC-MK2

Cell line · Product number 305149

LLC-MK2 is a continuous epithelial cell line established from the renal tissue of adult rhesus monkeys (*Macaca mulatta*). This cell line was originally i...

€430.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
  • CoA
1

01General information

Description

LLC-MK2 là dòng tế bào biểu mô liên tục được thiết lập từ mô thận của khỉ rhesus trưởng thành (*Macaca mulatta*). Dòng tế bào này ban đầu được phân lập vào những năm 1950 thông qua quá trình tiêu hóa bằng trypsin của mô thận được thu thập từ sáu con khỉ rhesus. Tế bào LLC-MK2 có đặc tính phát triển bám dính và đã được sử dụng rộng rãi trong virology do tính nhạy cảm cao với nhiều loại virus, bao gồm virus viêm dạ dày ruột bò 1, virus polio người 1 và virus coxsackie B4 ở người. Nguồn gốc của dòng tế bào và tính nhạy cảm với virus khiến nó trở thành mô hình lý tưởng để nghiên cứu quá trình nhân lên của virus và tác động cytopathogenic.

Dòng tế bào LLC-MK2 nổi tiếng với khả năng được nuôi cấy trong môi trường hóa học định nghĩa, không chứa huyết thanh, cho phép điều kiện thí nghiệm được kiểm soát. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng các tế bào này có thể thích nghi với điều kiện không chứa huyết thanh mà không ảnh hưởng đến sự phát triển, mặc dù các văn hóa ban đầu được duy trì trong môi trường chứa lượng lớn huyết thanh ngựa. Việc thích nghi với môi trường nuôi cấy được định nghĩa hóa học đặc biệt có lợi cho các nghiên cứu vi rút học, vì nó giảm thiểu sự biến đổi do huyết thanh gây ra và hỗ trợ việc duy trì dòng tế bào lâu dài. Hơn nữa, dòng LLC-MK2 đã được chứng minh là duy trì độ nhạy cảm với vi rút tương đương với tế bào thận khỉ nguyên phát, khiến nó trở thành công cụ đáng tin cậy cho các nghiên cứu định lượng vi rút và sản xuất vắc-xin.

Ngoài vai trò trong vi sinh học, LLC-MK2 cũng đã được nghiên cứu về tiềm năng gây ung thư. Mặc dù nó có một số đặc điểm biến đổi, như khả năng phát triển trong agar mềm, nó không hình thành khối u trong các mô hình in vivo, cho thấy nguy cơ gây ung thư hạn chế. Đặc điểm này càng nhấn mạnh tính hữu ích của nó như một dòng tế bào mô hình cho các nghiên cứu in vitro, đồng thời xác nhận sự không phù hợp của nó cho các ứng dụng điều trị hoặc in vivo.

Tissue
Thận
Synonyms
  • Llc-Mk2
  • LLC-MK-2
  • LLC-MK2 Original
  • LLCMK2
  • LLcMK2
  • Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

02Classification

Organism
Rhesus macaque
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Thượng bì

04Identifiers

Citation
LLC-MK2 (Mã sản phẩm Cytion: 305149)
NCBI TaxID
9544
Cellosaurus
CVCL_3009

05Expression and susceptibility

Protein expression
Chất hoạt hóa plasminogen

06Handling and culture

Culture medium
Phương tiện 199, chứa: 2,7 mM glutamine ổn định, chứa: 2,2 g/L NaHCO₃, chứa: EBSS (Số hiệu sản phẩm Cytion 820101a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung 1% huyết thanh ngựa vào môi trường nuôi cấy
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi các tế bào bám dính và rửa chúng bằng PBS không chứa canxi và magiê. Đối với bình T25, sử dụng 3-5 ml PBS, và đối với bình T75, sử dụng 5-10 ml. Sau đó, phủ hoàn toàn các tế bào bằng Accutase, sử dụng 1-2 ml cho bình T25 và 2,5 ml cho bình T75. Để tế bào ủ ở nhiệt độ phòng trong 8-10 phút để tách chúng ra. Sau khi ủ, nhẹ nhàng trộn tế bào với 10 ml môi trường để tái phân tán chúng, sau đó ly tâm ở 300xg trong 3 phút. Loại bỏ dịch trên, tái phân tán tế bào trong môi trường tươi và chuyển chúng vào các bình mới đã chứa môi trường tươi.
Seeding density
4 × 10⁴ tế bào/cm²
Fluid renewal
2 đến 3 lần mỗi tuần
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

08Donor

Donor age
Người lớn