LLC-MK2

A LLC-MK2 é uma linhagem celular epitelial contínua estabelecida a partir do tecido renal de macacos rhesus adultos (*Macaca mulatta*). Essa linhagem celular foi originalmente isolada na década de 1950 por meio da tripsinização de tecido renal agrupado proveniente de seis macacos rhesus. As células LLC-MK2 apresentam características de crescimento aderente e têm sido amplamente utilizadas em virologia devido à sua alta suscetibilidade a vários vírus, incluindo o vírus da diarreia viral bovina 1, o poliovírus humano 1 e o coxsackievírus humano B4. A origem da linhagem celular e sua suscetibilidade a vírus a tornam um modelo ideal para o estudo da replicação viral e dos efeitos citopatogênicos.

A linhagem celular LLC-MK2 é conhecida por sua capacidade de ser cultivada em meios quimicamente definidos e livres de soro, o que permite condições experimentais controladas. Pesquisas demonstraram que essas células podem ser adaptadas a condições livres de soro sem comprometer o crescimento, embora as culturas iniciais tenham sido mantidas em meios contendo quantidades significativas de soro de cavalo. A adaptação a meios quimicamente definidos é particularmente vantajosa para estudos virológicos, pois minimiza a variabilidade introduzida pelo soro e permite a manutenção da linha celular a longo prazo. Além disso, demonstrou-se que a linha LLC-MK2 mantém uma sensibilidade viral comparável à das células renais primárias de macaco, tornando-a uma ferramenta confiável para estudos de titulação viral e produção de vacinas.

Além de seu papel na virologia, a LLC-MK2 também foi investigada quanto ao seu potencial tumorigênico. Embora apresente certas características de transformação, como a capacidade de crescer em ágar mole, ela não forma tumores em modelos in vivo, sugerindo um risco tumorigênico limitado. Essa característica ressalta ainda mais sua utilidade como linha celular modelo para estudos in vitro, ao mesmo tempo em que confirma sua inadequação para aplicações terapêuticas ou in vivo.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.