Skip to content
LLC-MK2
Tissue
ไต
Synonyms
Llc-Mk2, LLC-MK-2, LLC-MK2 Original, LLCMK2, LLcMK2, Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

Documents

LLC-MK2

Cell line · Product number 305149

LLC-MK2 is a continuous epithelial cell line established from the renal tissue of adult rhesus monkeys (*Macaca mulatta*). This cell line was originally i...

€430.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
  • CoA
1

01General information

Description

LLC-MK2 เป็นสายเซลล์เยื่อบุผิวชนิดต่อเนื่องที่สร้างขึ้นจากเนื้อเยื่อไตของลิงแสมเรซัส (Macaca mulatta) สายเซลล์นี้ถูกแยกครั้งแรกในช่วงทศวรรษ 1950 โดยวิธีการย่อยด้วยทริปซินจากเนื้อเยื่อไตที่รวบรวมมาจากลิงแสมเรซัส 6 ตัวเซลล์ LLC-MK2 แสดงลักษณะการเจริญเติบโตแบบเกาะติดและถูกนำมาใช้อย่างกว้างขวางในด้านไวรัสวิทยาเนื่องจากมีความไวสูงต่อไวรัสหลากหลายชนิด รวมถึงไวรัสโรคลำไส้อักเสบในโค 1, ไวรัสโปลิโอในมนุษย์ 1 และโค๊กแซกกีไวรัส B4 ในมนุษย์ ต้นกำเนิดและความไวต่อไวรัสของสายพันธุ์เซลล์นี้ทำให้เป็นแบบจำลองที่เหมาะสมสำหรับการศึกษาการจำลองไวรัสและผลกระทบต่อเซลล์

สายเซลล์ LLC-MK2 เป็นที่รู้จักกันดีในด้านความสามารถในการเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่ปราศจากเซรั่มและกำหนดองค์ประกอบทางเคมีอย่างชัดเจน ซึ่งช่วยให้สามารถควบคุมสภาวะการทดลองได้อย่างแม่นยำ งานวิจัยได้แสดงให้เห็นว่าเซลล์เหล่านี้สามารถปรับตัวให้อยู่ในสภาวะปราศจากเซรั่มได้โดยไม่ส่งผลกระทบต่อการเจริญเติบโต แม้ว่าในระยะเริ่มต้นจะเพาะเลี้ยงในอาหารที่มีเซรั่มม้าในปริมาณมากก็ตามการปรับตัวให้เข้ากับสื่อที่มีสารเคมีกำหนดไว้อย่างชัดเจนนั้นมีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการศึกษาทางไวรัสวิทยา เนื่องจากช่วยลดความแปรปรวนที่เกิดจากซีรัมและสนับสนุนการบำรุงรักษากลุ่มเซลล์ในระยะยาว นอกจากนี้ สายพันธุ์ LLC-MK2 ยังแสดงให้เห็นถึงความไวต่อไวรัสที่เทียบเท่ากับเซลล์ไตของลิงต้นแบบ ทำให้เป็นเครื่องมือที่เชื่อถือได้สำหรับการทดสอบความเข้มข้นของไวรัสและการศึกษาการผลิตวัคซีน

นอกเหนือจากบทบาทในไวรัสวิทยาแล้ว LLC-MK2 ยังได้รับการศึกษาเกี่ยวกับศักยภาพในการก่อให้เกิดเนื้องอกอีกด้วย แม้ว่าจะแสดงลักษณะที่เปลี่ยนแปลงบางประการ เช่น ความสามารถในการเจริญเติบโตในวุ้นอ่อน แต่ก็ไม่สามารถก่อตัวเป็นเนื้องอกในแบบจำลองในร่างกายได้ ซึ่งบ่งชี้ถึงความเสี่ยงในการก่อให้เกิดเนื้องอกที่จำกัด ลักษณะนี้ยิ่งตอกย้ำประโยชน์ของมันในฐานะสายเซลล์ต้นแบบสำหรับการศึกษาในหลอดทดลอง ขณะเดียวกันก็ยืนยันถึงความไม่เหมาะสมสำหรับการนำไปใช้ในทางบำบัดหรือในร่างกาย

Tissue
ไต
Synonyms
  • Llc-Mk2
  • LLC-MK-2
  • LLC-MK2 Original
  • LLCMK2
  • LLcMK2
  • Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

02Classification

Organism
Rhesus macaque
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
เยื่อบุผิว

04Identifiers

Citation
LLC-MK2 (หมายเลขในแคตตาล็อก Cytion 305149)
NCBI TaxID
9544
Cellosaurus
CVCL_3009

05Expression and susceptibility

Protein expression
พลาสมินเจนแอคติเวเตอร์

06Handling and culture

Culture medium
มีเดียม 199, w: 2.7 mM สเตเบิลกลูตามีน, w: 2.2 g/L NaHCO3, w: EBSS (หมายเลขบทความ Cytion 820101a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมซีรั่มม้า 1% ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Seeding density
4 x 10^4 เซลล์/ซม.^2
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Donor age
ผู้ใหญ่