AB2.2

A linhagem celular AB2.2 é uma linhagem de células-tronco embrionárias (ES) murinas amplamente utilizada, derivada da linhagem de camundongos 129S7 (também conhecida como 129P2/OlaHsd). Ela tem desempenhado um papel de destaque na modificação gênica e na geração de camundongos transgênicos devido à sua robusta capacidade de expansão in vitro e manipulação genética. As células AB2.2 são pluripotentes, capazes de contribuir para todas as camadas germinativas, e têm sido fundamentais na produção de quimeras com competência germinativa. No entanto, assim como muitas linhas de células ES mantidas por longos períodos de cultura, a AB2.2 é propensa à instabilidade cromossômica, especialmente à aneuploidia envolvendo o cromossomo 8.

A análise citogenética da AB2.2 e de suas sublinhagens revelou uma alta frequência de anomalias cromossômicas, sendo a trissomia 8 mosaica e pura particularmente comum. Em um estudo, a AB2.2 apresentou um cariótipo mosaico envolvendo ganhos nos cromossomos 8 e Y, incluindo configurações como 42,XY,+Y,+8 / 41,XY,+Y / 40,XY. Entre suas sublinhagens, foram identificadas anomalias cariotípicas adicionais, como trissomias duplas envolvendo os cromossomos 8 e 11 e cromossomos derivados complexos decorrentes de translocações desequilibradas envolvendo o cromossomo 8. Essas aberrações estruturais e numéricas estão associadas à diminuição da eficiência de transmissão germinativa, e sua presença complica a interpretação das relações genótipo-fenótipo em animais quiméricos.

Dado seu background genético e suscetibilidade à instabilidade cromossômica, o AB2.2 continua sendo uma ferramenta poderosa na genética de camundongos, mas requer um controle de qualidade cuidadoso. Recomenda-se a triagem rotineira do cariótipo — incluindo tanto a banda G quanto a FISH — antes de prosseguir com a injeção no blastocisto, a fim de garantir a integridade cromossômica necessária para uma transmissão germinativa confiável e análises fenotípicas precisas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.