Hep-70.4

A linhagem celular de hepatoma Hep-70.4 é derivada de um tumor hepático de camundongo, especificamente da linhagem C57BL/6J. Essa linhagem celular se destaca por suas mutações no gene p53, que foram identificadas em diferentes passagens durante a propagação in vitro. Na passagem número 8, foi detectado um sinal adicional fraco na análise do polimorfismo de conformação de fita simples (SSCP), indicando a presença de uma mutação no p53. Na passagem número 38, foram identificadas duas mutações pontuais distintas no p53: uma transversão de G:C para C:G no códon 135 e uma transversão de C:G para G:C no códon 138 do exão 5. Essas mutações levaram a alterações de aminoácidos de alanina para prolina e de cisteína para triptofano, respectivamente.

A linhagem celular Hep-70.4 apresenta um fenótipo morfológico que varia significativamente durante sua propagação. Algumas sublinhagens exibem uma morfologia epitelial, enquanto outras apresentam uma aparência semelhante à de fibroblastos. Essa heterogeneidade reflete a natureza complexa da linhagem celular e sua adaptabilidade sob diferentes condições de cultura. A presença de alelos p53 tanto normais quanto mutantes nas primeiras passagens sugere que as mutações conferem uma vantagem seletiva de crescimento, levando à predominância de clones mutantes ao longo do tempo.

A análise das proteínas dos filamentos intermediários da linha celular Hep-70.4 revelou a expressão das queratinas simples K8 e K18, típicas das células hepáticas normais, bem como da vimentina e da queratina K19 em graus variáveis. Esses padrões proteicos confirmam a origem hepatocítica da linhagem celular e sua classificação como uma linhagem de hepatoma. A estabilidade genômica da Hep-70.4 foi avaliada adicionalmente por meio da análise de impressão digital de DNA, que não revelou nenhuma anomalia estrutural significativa, embora tenham sido observadas alterações nas intensidades relativas de certas bandas com o aumento do número de passagens.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.