Hep-70.4

Hep-70.4 肝癌細胞系源自小鼠肝臟腫瘤，具體而言是來自 C57BL/6J 小鼠品系。該細胞系因 p53 基因的突變而備受矚目，這些突變是在體外傳代過程中於不同傳代次數時被鑑定出來的。 在第 8 代傳代時，單鏈構象多態性（SSCP）分析中檢測到一項微弱的額外訊號，顯示存在 p53 突變。 到了第 38 代，已鑑定出兩種明顯的 p53 點突變：外顯子 5 的第 135 個密碼子處出現 G:C 轉為 C:G 的轉位突變，以及第 138 個密碼子處出現 C:G 轉為 G:C 的轉位突變。 這些突變分別導致氨基酸從丙胺酸變為脯胺酸，以及從半胱胺酸變為色氨酸。

Hep-70.4 細胞系在傳代過程中，其形態表型會發生顯著變化。部分亞系呈現上皮細胞形態，而其他亞系則呈現成纖維細胞樣外觀。這種異質性反映了該細胞系的複雜性質，以及其在不同培養條件下的適應能力。 在早期傳代中同時存在正常和突變的 p53 等位基因，這表明這些突變賦予了選擇性的生長優勢，導致隨著時間的推移，突變克隆逐漸佔據主導地位。

對 Hep-70.4 細胞系進行的中間絲蛋白分析顯示，該細胞系表達正常肝細胞特有的簡單角蛋白 K8 和 K18，同時也以不同程度表達維曼汀和角蛋白 K19。 這些蛋白質模式證實了該細胞系的肝細胞起源，並確認其歸類為肝癌細胞系。透過DNA指紋分析進一步評估了Hep-70.4的基因組穩定性，結果未發現任何重大的結構異常，儘管隨著傳代次數增加，某些條帶的相對強度出現了變化。

37°C，5% CO_₂，加濕環境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。

為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。

冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。

在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。

詳情請參閱我們的 《保固聲明》。