Hep-70.4

เซลล์ไลน์ Hep-70.4 hepatoma ได้มาจากเนื้องอกในตับของหนู โดยเฉพาะจากสายพันธุ์หนู C57BL/6J เซลล์ไลน์นี้มีความโดดเด่นจากการกลายพันธุ์ในยีน p53 ซึ่งถูกระบุในระหว่างการเพาะเลี้ยงในหลอดทดลองในหลายช่วงการผ่าน ที่การผ่านครั้งที่ 8 มีการตรวจพบสัญญาณเพิ่มเติมที่อ่อนแอในการวิเคราะห์ความหลากหลายของโครงสร้างสายเดี่ยว (SSCP) ซึ่งบ่งชี้ถึงการกลายพันธุ์ของ p53โดยหมายเลขการผ่านที่ 38 พบการกลายพันธุ์จุด p53 สองจุดที่แตกต่างกัน: การเปลี่ยนคู่เบส G:C เป็น C:G ที่โคดอน 135 และการเปลี่ยนคู่เบส C:G เป็น G:C ที่โคดอน 138 ของเอ็กซอน 5 การกลายพันธุ์เหล่านี้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงของกรดอะมิโนจากอะลานีนเป็นโพรลีน และจากซิสเทอีนเป็นทริปโตเฟน ตามลำดับ

เซลล์ไลน์ Hep-70.4 แสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาที่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญระหว่างการขยายพันธุ์ บางสายย่อยแสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาแบบเยื่อบุผิว ในขณะที่บางสายแสดงลักษณะคล้ายไฟโบรบลาสต์ ความไม่สม่ำเสมอเหล่านี้สะท้อนถึงธรรมชาติที่ซับซ้อนของเซลล์ไลน์และความสามารถในการปรับตัวภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงที่แตกต่างกัน การมีอยู่ของทั้งอัลลีล p53 ปกติและกลายพันธุ์ในระยะเริ่มต้นบ่งชี้ว่าการกลายพันธุ์เหล่านี้ให้ข้อได้เปรียบในการเจริญเติบโตแบบคัดเลือก ส่งผลให้โคลนที่กลายพันธุ์มีจำนวนมากกว่าเมื่อเวลาผ่านไป

การวิเคราะห์โปรตีนเส้นใยขนาดกลางของเซลล์ไลน์ Hep-70.4 พบการแสดงออกของเคอราตินชนิดง่าย K8 และ K18 ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของเซลล์ตับปกติ รวมถึงวิเมนตินและเคอราติน K19 ในระดับที่แตกต่างกัน รูปแบบโปรตีนเหล่านี้ยืนยันถึงต้นกำเนิดของเซลล์ไลน์จากเซลล์ตับและจัดให้อยู่ในกลุ่มเซลล์มะเร็งตับความเสถียรทางจีโนมของ Hep-70.4 ได้รับการประเมินเพิ่มเติมผ่านการวิเคราะห์ลายนิ้วมือดีเอ็นเอ ซึ่งไม่พบความผิดปกติทางโครงสร้างที่สำคัญใดๆ แม้ว่าจะพบการเปลี่ยนแปลงในความเข้มสัมพัทธ์ของแถบบางแถบเมื่อจำนวนรุ่นเพิ่มขึ้น

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.