Lec1

A linhagem celular Lec1 é um clone mutante selecionado por sua resistência à aglutinina do gérmen de trigo, derivada do clone CHO parental Pro-5. Esse processo de seleção resultou em uma linhagem celular com um defeito específico de glicosilação, caracterizada pela presença de carboidratos ligados a N com um intermediário Man5-GlcNAc2-Asn bloqueado. Esse bloqueio se deve à ausência da N-acetilglucosaminiltransferase I (GlcNAc-TI), uma enzima essencial para a progressão da síntese de glicanos para formas mais complexas. Como resultado, as células Lec1 acumulam glicoproteínas com oligossacarídeos truncados do tipo rico em manose.

As células Lec1 são inestimáveis para o estudo da biossíntese de glicoproteínas, particularmente para compreender como a glicosilação N-ligada alterada afeta a função celular. Pesquisadores utilizam células Lec1 para investigar o impacto da glicosilação no dobramento de proteínas, na estabilidade, na função dos receptores e no tráfego intracelular. Além disso, essas células oferecem uma plataforma única para o estudo da compartimentação de glicoproteínas endógenas induzidas por infecção viral ou por transfecção de DNA estranho. As estruturas glicânicas simplificadas nas células Lec1 também as tornam ideais para a produção de glicoproteínas mais fáceis de analisar em diversos contextos experimentais.

Elas são utilizadas principalmente in vitro para estudos mecanísticos e aplicações biotecnológicas envolvendo a produção e análise de glicoproteínas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.