Gå direkte til indholdet
HK-CRISPR-Nup93-mEGFP
Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom

Dokumenter

HK-CRISPR-Nup93-mEGFP

Cell line · Varenummer 300655

The HK-CRISPR-Nup93-mEGFP cell line is derived from Hela Kyoto cells and engineered using CRISPR/Cas9 technology to express Nup93 fused with monomeric enh...

€800.00ekskl. moms og fragt
På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
  • CoA
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

HK-CRISPR-Nup93-mEGFP-cellelinjen stammer fra Hela Kyoto-celler og er konstrueret ved hjælp af CRISPR/Cas9-teknologi til at udtrykke Nup93 fusioneret med monomert forstærket grønt fluorescerende protein (mEGFP). Dette giver mulighed for realtidsvisualisering af Nup93 inden for kernehylsteret, hvilket hjælper med at studere nuklear-cytoplasmatisk transport, samling af nukleare porekomplekser og integritet af kernehylsteret.

Nup93 er afgørende for at opretholde kerneporekompleksets arkitektur og funktion. MEGFP-mærket gør det muligt at spore dets dynamik og interaktioner, hvilket letter billeddannelsesteknikker med høj opløsning som konfokalmikroskopi. Denne cellelinje hjælper forskere med at forstå genregulering, nukleocytoplasmatisk transport og cellulære stressresponser.

HK-CRISPR-Nup93-mEGFP-cellelinjen er en værdifuld ressource til at studere cellebiologi og sygdomme, der er forbundet med nukleare porekomplekser, og bidrager til potentielle terapeutiske strategier rettet mod nukleare transportveje. Den er især nyttig til at udforske kernekonvoluttens rolle i cellulær funktion og patologi.

Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an mEGFP knock-in at the endogenous Nup93 locus for nuclear pore structural studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epithel-lignende celler med mosaikstenform

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK-CRISPR-Nup93-mEGFP (Cytion katalognummer 300655)
NCBI-skattenummer
9606
Indskyder
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
Nup153, mEGFP-tag

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner