Preskoči na vsebino
HK-CRISPR-Nup93-mEGFP
Tkivo
Endocervix
Bolezen
Adenokarcinom

Dokumenti

HK-CRISPR-Nup93-mEGFP

Cell line · Številka izdelka 300655

The HK-CRISPR-Nup93-mEGFP cell line is derived from Hela Kyoto cells and engineered using CRISPR/Cas9 technology to express Nup93 fused with monomeric enh...

€800.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija HK-CRISPR-Nup93-mEGFP izhaja iz celic Hela Kyoto in je s tehnologijo CRISPR/Cas9 spremenjena tako, da izraža Nup93, združen z monomernim okrepljenim zelenim fluorescenčnim proteinom (mEGFP). To omogoča vizualizacijo Nup93 v realnem času znotraj jedrske ovojnice, kar pomaga pri preučevanju jedrsko-citoplazmatskega transporta, sestavljanja kompleksa jedrskih por in celovitosti jedrske ovojnice.

Nup93 je ključnega pomena za ohranjanje zgradbe in delovanja kompleksa jedrskih por. Oznaka mEGFP omogoča sledenje njegovi dinamiki in interakcijam, kar olajša tehnike slikanja visoke ločljivosti, kot je konfokalna mikroskopija. Ta celična linija pomaga raziskovalcem pri razumevanju regulacije genov, nukleocitoplazemskega prometa in odzivov celic na stres.

Celična linija HK-CRISPR-Nup93-mEGFP je dragocen vir za preučevanje celične biologije in bolezni, povezanih s kompleksom jedrnih por, ter prispeva k potencialnim terapevtskim strategijam, usmerjenim na poti jedrnega transporta. Še posebej je uporabna za raziskovanje vloge jedrske ovojnice pri celičnem delovanju in patologiji.

Tkivo
Endocervix
Bolezen
Adenokarcinom

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an mEGFP knock-in at the endogenous Nup93 locus for nuclear pore structural studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelnim celicam podobne celice z obliko mozaičnih kamenčkov

04Identifikatorji

Navajanje vira
HK-CRISPR-Nup93-mEGFP (kataloška številka Cytion 300655)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Vlagatelj
Laboratorij Ellenberg (EMBL)

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
Nup153, mEGFP-oznaka

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
30 let
Etnična pripadnost
Afroameričan