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A704 Zellen
Gewebe
Niere
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
A.704, A-704

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A704 Zellen

Cell line · Artikelnummer 300217

A-704 ist eine menschliche Epithelzelllinie, die aus Nierengewebe eines 78-jährigen männlichen Patienten mit Adenokarzinom gewonnen wurde. Diese Zelllinie weist ein epitheliales …

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

A-704 ist eine menschliche Epithelzelllinie, die aus dem Nierengewebe eines 78-jährigen männlichen Patienten mit Adenokarzinom stammt. Diese Zelllinie weist eine epitheliale Morphologie auf. Sie ist eine wertvolle Ressource für die Krebsforschung, insbesondere für die Untersuchung von Adenokarzinomen. A-704 ist eine vielseitige Zelllinie, die in der 3D-Zellkultur und als Transfektionswirt eingesetzt werden kann.

A-704 wurde von D.J. Giard entwickelt und zeichnet sich durch Konsistenz und Zuverlässigkeit in der experimentellen Umgebung aus. Die Karyotyp-Analyse zeigt, dass A-704-Zellen Anomalien wie Brüche, Dizentrik und Endoreduplikation aufweisen, die von diploid bis hyperdiploid, hypertriploid bis hypertetraploid reichen.

In immunsupprimierten Mäusen sind A-704-Zellen zwar nicht tumorigen, können aber in einem halbfesten Medium Kolonien bilden. A-704-Zellen weisen spezifische Isoenzymprofile auf, darunter AK-1, ES-D, G6PD, GLO-I, Me-2, PGM1 und PGM3.

Gewebe
Niere
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
  • A.704
  • A-704

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
Nein
Karyotyp
(P59) diploid bis hyperdiploid, hypertriploid bis hypertetraploid mit Anomalien wie Brüchen, Dizentrik und Endoreduplikation

04Bezeichner

Quellenangabe
A704 (Cytion Katalognummer 300217)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1065

05Expression und Anfälligkeit

Isoenzyme
Me-2, 1, PGM3, 1-2, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 2, G6PD, B

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm² führen innerhalb von 4 Tagen zu einer konfluenten Monoschicht.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
78 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch