Siirry sisältöön
NCI-H520
Kudos
Keuhkot
Sairaus
Keuhkojen okasolusyöpä
Synonyymit
NCI-H520, H-520, NCI-HUT-520, NCIH520

Asiakirjat

NCI-H520

Cell line · Tuotenumero 305063

The cell line was established in 1982 from a sample of a lung mass taken by A.F. Gazdar from a patient with squamous cell carcimoma of the lung. A greatly re...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
Solulinja perustettiin vuonna 1982 A.F. Gazdarin keuhkomassanäytteestä, jonka hän oli ottanut potilaalta, jolla oli keuhkojen levyepiteelikarsinooma. Tämä solulinja ilmentää huomattavasti vähemmän p53-mRNA:ta kuin normaali keuhkokudos. Soluilla ei ole karkeasti havaittavissa rakenteellisia DNA-poikkeavuuksia. Solut värjäytyvät positiivisiksi keratiinin ja vimentiinin suhteen, mutta negatiivisiksi neurofilamentti-triplet-proteiinin suhteen. Solut voivat muodostaa pesäkkeitä pehmeällä agarilla seerumin kanssa tai ilman sitä.
Kudos
Keuhkot
Sairaus
Keuhkojen okasolusyöpä
Synonyymit
  • NCI-H520
  • H-520
  • NCI-HUT-520
  • NCIH520

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteeli
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä, joille oli annettu ihonalaisesti 1×107 solua (kasvaimia kehittyi 21 päivän kuluessa 100 %:n tiheydellä (5/5)).
Kaksinkertaistumisaika
32-60 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
NCI-H520 (Cytionin luettelonumero 305063)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1566

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % lämpöinaktivoidulla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

07Lahjoittaja

Etnisyys
Eurooppalainen