Siirry sisältöön
NCI-H295R
Kudos
Lisämunuainen
Sairaus
Syöpä
Synonyymit
NCI-H295R, NCI H295R, NCIH295R, H-295R, H295R-S1

Asiakirjat

NCI-H295R

Cell line · Tuotenumero 300483

H295R was adapted from the NCI-H295 pluripotent adrenocortical carcinoma cell line established by A.F. Gazdar and associates (1990) from a carcinoma of the a...

€650.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
H295R on muunnettu A.F. Gazdarin ja kumppaneiden (1990) lisämunuaiskuoren karsinoomasta perustamasta NCI-H295 pluripotentista lisämunuaiskuoren karsinooman solulinjasta. Alkuperäiset solut mukautettiin kasvatusalustaan, joka lyhensi populaation kaksinkertaistumisaikaa 5 päivästä 2 päivään. Mukautetut solut valittiin kasvamaan yksikerroksisina, toisin kuin alkuperäiset solut, jotka kasvoivat suspensiossa. Tämä solulinja säilyttää kyvyn tuottaa lisämunuaisen androgeeneja. Se reagoi angiotensiini II:een ja kaliumioneihin.
Kudos
Lisämunuainen
Sairaus
Syöpä
Synonyymit
  • NCI-H295R
  • NCI H295R
  • NCIH295R
  • H-295R
  • H295R-S1

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen

04Tunnisteet

Lähdeviite
NCI-H295R (Cytionin luettelonumero 300483)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_0458

05Ilmentyminen ja alttius

Tuotteet
Aldosteroni, kortisoli, C19-steroidit

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
Voit ostaa valmiin NCI-H295R-solukasvatusmediumin (820402) tai täydentää sitä DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukoosia, w: 2,5 mM L-glutamiinia, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvaattia, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820400a) alla olevilla lisäaineilla
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 5 % FBS:llä, 0,00625 mg/ml insuliinilla, 0,00625 mg/ml transferriinillä, 6,25 ng/ml seleenillä, 1,25 mg/ml naudan seerumin albumiinilla, 0,00535 mg/ml linolihapolla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
48 tuntia
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
48 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen