MG-63-solulinja: Yksityiskohtainen opas MG-63-solujen käyttöön osteosarkooman tutkimuksessa

MG-63-solut ovat fibroblastien kaltaisia ihmisen osteosarkoomasoluja, joilla on laaja valikoima tutkimussovelluksia biolääketieteen alalla. Tähän voi kuulua luuhun liittyvien prosessien, kuten luun kehityksen ja erilaistumisen, tutkiminen. Lisäksi MG-63-solulinja toimii sopivana in vitro -mallina luusolujen elinkelpoisuuden, proliferaation ja adheesion tutkimiseen.

MG-63-solulinjan yleiset ominaisuudet ja alkuperä

Tässä artikkelin osiossa käsitellään MG-63-solulinjan alkuperää ja yleisiä ominaisuuksia. Opit seuraavaa: Mikä on MG-63-solulinja? Mikä on MG-63-solulinjan alkuperä? Millainen on MG-63-solujen morfologia? Mikä on MG-63-solujen koko?

• MG-63 on osteoblastisolulinja, joka on peräisin 14-vuotiaan (valkoihoisen) osteosarkoomapotilaan luusta. A. Billiau ja kollegat tallettivat tämän solulinjan vuonna 1977.
• MG-63-solulinjalla on fibroblastien kaltainen morfologia.
• Ihmisen osteosarkoomasolut (MG-63) ovat hypotriploideja. Näiden solujen modaalinen kromosomiluku on 66, jota esiintyy noin 44 prosentissa solupopulaatiosta. Myös korkeampia ploidioita on raportoitu lähes 2 %:ssa solupopulaatiosta. Lisäksi 18–19 merkkikromosomia esiintyy runsaasti kaikissa soluissa.

Sarkoomasoluviljelmän SEM-kuvaus.

MG-63-solulinjan viljelyä koskevat tiedot

Tärkeät tiedot solulinjan viljelyvaatimuksista voivat helpottaa työtäsi. Tässä artikkelin osiossa luetellaan kaikki MG-63-solujen viljelyyn ja ylläpitoon liittyvät keskeiset seikat. Täältä saat selville: Mikä on MG-63-solujen kaksinkertaistumisaika? Mitä kasvualustoja käytetään MG-63-soluille? Mikä on MG-63-solujen kylvötiheys?

MG-63-solujen viljelyn avainkohdat

Kaksinkertaistumisaika

MG-63-solujen populaation kaksinkertaistumisaika on 28–38 tuntia viljelyolosuhteista riippuen.

Kasvuominaisuudet

MG-63 on adheesiivinen solulinja.

Kylvötiheys

MG-63-soluille suositellaan solutiheyttä 1 x 10⁴ solua/cm². Adheesiiviset solut pestään 1 x fosfaattipuskuriliuoksella (PBS), josta on poistettu magnesium ja kalsium. Solut inkuboidaan sitten irrotusliuoksessa (Accutase), niihin lisätään tuoretta elatusainetta ja ne sentrifugoidaan. Kerätty solupelletti suspendoidaan uudelleen tuoreeseen elatusaineeseen ja annostellaan uuteen pulloon kasvattamista varten.

Kasvatusväliaine

MG-63-solujen viljelyyn käytetään DMEM- tai Ham's F12 -kasvatusliuoksia. Näitä elatusaineita voidaan täydentää 5 %:lla naudan sikiöseerumia (FBS), 3,0 g/l glukoosilla, 2,5 mM L-glutamiinilla ja 1,2 g/l NaHCO3:lla optimaalisen solukasvun saavuttamiseksi. Elatusaineet tulisi vaihtaa 2–3 kertaa viikossa.

Kasvatusolosuhteet

MG-63-solujen viljelyyn tarvitaan kostutettu inkubaattori, jonka lämpötila on 37 °C ja CO₂-pitoisuus 5 %.

Säilytys

Näitä osteoblastien kaltaisia soluja voidaan säilyttää nestemäisen typen höyryvaiheessa tai alle -150 °C:n lämpötilassa solujen elinkelpoisuuden säilyttämiseksi.

Jäädytysprosessi ja elatusaine

MG-63-solujen pakastamiseen käytetään CM-1- tai CM-ACF-kasvatusväliaineita. Yleensä suositellaan hidasta pakastusprosessia, jotta solut eivät kärsisi pakkassokista ja niiden elinkelpoisuus säilyy.

Sulatusprosessi

Jäädytetyt solut inkuboidaan 40–60 sekuntia esilämmitetyssä vesihauteessa (37 astetta). Solut suspendoidaan uudelleen tuoreeseen kasvualustaan ja kaadetaan uuteen pulloon. 24 tunnin inkuboinnin jälkeen kasvualusta vaihdetaan jäädytysaineiden poistamiseksi.  

Bioturvallisuustaso

MG-63-viljelmien käsittelyyn ja ylläpitoon tarvitaan bioturvallisuustason 1 laboratorio-olosuhteet.

MG-63-solut ennen ja jälkeen solukon täyttymisen.

MG-63-solulinja: edut ja haitat

MG-63 on laajalti käytetty osteoblastisolulinja. Siihen liittyy useita etuja ja haittoja. Tässä esitellään muutamia MG-63-solulinjan tärkeimpiä etuja ja haittoja.

Edut

MG-63-solujen edut ovat:

• Osteoblastien kaltaiset ominaisuudet

  MG-63-solulinjalla on osteoblastien kaltaisia ominaisuuksia, minkä vuoksi se sopii luuhun liittyvien prosessien ja sairauksien tutkimiseen. Sitä voidaan käyttää myös solujen adheesion, proliferaation ja elinkelpoisuuden tutkimiseen titaanipinnoilla [1].

• Soveltuvuus transfektioon

  MG-63-soluja käytetään laajasti transfektiotutkimuksissa, mikä mahdollistaa geenien ilmentymisen, toiminnan ja soluprosessien tutkimuksen.

• Korkea interferonituotanto

  MG-63-solut kykenevät tuottamaan suuria määriä interferonia. Ne tuottavat 3,7-kertaisen interferonisaannon cm²:tä kohti verrattuna diploidisiin fibroblasteihin, kun niitä indusoidaan sykloheksimidillä, polyinosiinihappo-polysytidiinihapolla ja aktinomysiinillä [2].

Haitat

MG-63-B-soluille ominaiset haitat ovat:

• Heterogeenisyys

  MG-63-soluissa esiintyy heterogeenisyyttä solupopulaation sisällä, mikä voi vaikuttaa toistettavuuteen.

• Kasvainsolulinja

  MG-63 on syöpäsolulinja, joka ei välttämättä edusta täysin normaalien solujen käyttäytymistä ja fysiologiaa, mikä rajoittaa sen käyttöä tietyissä laboratoriokokeissa.

Tilaa MG-63-kennot jo tänään

MG-63-solujen käyttökohteet

MG-63-solut ovat erinomainen tutkimusväline. Ne tarjoavat monia lupaavia sovelluksia tutkimusalalla. Tässä luetellaan muutamia MG-63-solujen tärkeimpiä tutkimussovelluksia.

• Luuhun liittyvien prosessien ja sairauksien tutkimus: MG-63-solut ovat osteoblastien kaltaisia (luuta muodostavia) soluja. Siksi näitä soluja käytetään laajasti luusairauksien ja soluprosessien, kuten kehityksen, erilaistumisen ja mineralisoitumisen, tutkimiseen. Lisäksi soluja käytetään laajasti luun paranemista edistävien lääkkeiden seulonnassa. Eräässä tutkimuksessa käytettiin MG-63-soluja tutkimaan Scutellaria baicalensis -kasvista vihreällä menetelmällä syntetisoitujen sinkkioksidin nanopartikkelien terapeuttista potentiaalia luusolujen proliferaatiossa, mineralisoitumisessa ja erilaistumisessa [3].
• Syöpätutkimus: MG-63-soluja käytetään laajalti syöpätutkimuksessa. Useissa tutkimuksissa on hyödynnetty näitä osteosarkoomasoluja syövän signalointireittien ymmärtämiseksi sekä lääkkeiden sytotoksisen ja terapeuttisen potentiaalin arvioimiseksi. Vuonna 2019 tehdyssä tutkimuksessa selvitettiin luonnollisen yhdisteen, tomentosinin, kasvainten vastaisia ominaisuuksia MG-63-solujen avulla. Tulokset osoittivat, että tomentosini vaikuttaa syöpää estävästi laukaisemalla solunsisäisten reaktiivisten happiyhdisteiden (ROS) tuotantoa [4].

MG-63-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut

Seuraavassa on esitetty joitakin tutkimusjulkaisuja, joissa käsitellään osteoblastien kaltaista MG-63-solulinjaa.

miR-192 lisää metotreksaatin herkkyyttä MG-63-osteosarkoomasoluissa

Tämä artikkeli julkaistiin Pathology – Research and Practice -lehdessä vuonna 2020. Tutkimuksessa käytettiin MG-63-soluja osteosarkooman syöpäsolujen (MG-63) lääkeresistenssiin liittyvien molekyylimekanismien tutkimiseen. Tulokset osoittivat, että miRNA-192 voisi olla hyödyllinen kohde osteosarkooman metotreksaattiresistenssin voittamisessa.

Vihreällä menetelmällä syntetisoidut sinkkioksidin nanopartikkelit säätelevät apoptoottista ilmentymistä MG-63-luusyöpäsoluissa

Tämä tutkimus on julkaistu Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology -lehdessä (2020). Tutkimuksessa raportoitiin Rehmanniae Radix -kasvista vihreällä menetelmällä syntetisoitujen sinkkioksidin nanopartikkelien (ZnONPs) syöpälääkinnällisestä potentiaalista luusyöpäsoluja (MG-63) vastaan.

Scutellaria baicalensis -kasvista peräisin olevien sinkkioksidin nanopartikkelien osteogeeninen erilaistuminen ja mineralisaatiopotentiaali ihmisen osteoblastien kaltaisissa MG-63-soluissa

Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2021 Materials Science and Engineering -lehdessä. Tutkimuksessa esitettiin Scutellaria baicalensis -kasvista biosynteettisesti valmistettujen sinkkioksidin nanopartikkelien luunparantavia ominaisuuksia MG-63-solulinjalla.

Kurkumiini estää MG-63-solujen proliferaatiota ja invaasiota inaktivoimalla p-JAK2/p-STAT3-signaalireitin

Tämä tutkimus julkaistiin vuonna 2021 Onco Targets and Therapy -lehdessä. Tutkimuksessa esitettiin kurkumiiniyhdisteen antituumorivaikutuksia osteosarkoomasoluja vastaan. Yhdiste sai aikaan nämä terapeuttiset vaikutukset inaktivoimalla p-JAK2/p-STAT3-syöpäsignaalireitin.

Bioenergiakäsitellyn D3-vitamiinin vaikutus MG-63-solulinjan luustoon liittyvien parametrien proliferaatioon, erilaistumiseen ja kypsymiseen

Tämä tutkimus julkaistiin vuonna 2018 International Journal of Biomedical Engineering and Clinical Science -lehdessä. Tutkimuksessa havaittiin, että bioenergiakäsitelty D3-vitamiini vaikuttaa myönteisesti luusolujen proliferaatioon, kypsymiseen ja erilaistumiseen sekä parantaa luun terveyttä kuvaavia parametrejä.

MG-63-solulinjaan liittyviä resursseja: protokollat, videot ja muuta

MG-63-solulinjasta on saatavilla useita resursseja, joissa selitetään sen soluviljely- ja transfektioprotokollat.

• MG-63-solujen transfektio: Tässä videossa selitetään kattavasti MG-63-solujen transfektioprotokolla.
• Adheesiivisten solujen siirto: Tämä video opastaa adheesiivisten solulinjojen aliviljelyssä tai siirrossa. Se auttaa sinua oppimaan soluviljelyn perusprotokollat.

Seuraavasta linkistä löydät MG-63-solujen viljelyohjeet.

• MG-63-solujen viljely: Tällä verkkosivustolla on helppokäyttöinen ja yksityiskohtainen ohje MG-63-solulinjan aliviljelyyn tai jakamiseen.

Usein kysyttyjä kysymyksiä MG-63-soluista

Lähteet

1. Wandiyanto, J.V. ym., Osteoblastien kaltaisten MG-63-solujen kohtalo esikäsitellyillä bakteereja tuhoavilla nanorakenteisilla titaanipinnoilla. Materials (Basel), 2019. 12(10).
2. Billiau, A. ym., Ihmisen interferoni: massatuotanto äskettäin perustetussa MG-63-solulinjassa. Antimicrob Agents Chemother, 1977. 12(1): s. 11–5.
3. Tang, Y., ym., Scutellaria baicalensis -kasvista peräisin olevien sinkkioksidin nanopartikkelien osteogeeninen erilaistuminen ja mineralisaatiopotentiaali ihmisen osteoblastien kaltaisissa MG-63-soluissa. Materials Science and Engineering: C, 2021. 119: s. 111656.
4. Lee, C.M. ym., Tomentosinilla on syöpää estävä vaikutus ihmisen osteosarkooma-MG-63-soluissa solunsisäisten reaktiivisten happiyhdisteiden induktion kautta. International journal of molecular sciences, 2019. 20(6): s. 1508.