Bevezetés

A U2OS sejtek A vonal — amelyet U-2 OS, U-2OS, U-2-OS, U2-OS, U20-S, U20S és 2T néven is ismernek — az egyik legkorábban létrehozott emberi ráksejtvonal, amelyet ma is aktívan használnak. A vonalat az 1960-as évek közepén hozták létre egy közepesen differenciált sípcsont-osteosarcomából, és először Pontén és Saksela írták le 1967-ben. [1]. Létrehozása révén a kutatók egy kezelhető, adhezív, epiteliális morfológiájú modellt kaptak a csontdaganatok, a tumorbiológia és az alapvető sejtbiológia tanulmányozásához. Az azt követő évtizedek során az U2OS a DNS-javítási kutatások, az osteosarcoma elleni gyógyszerfejlesztés, a sejtciklus-elemzés és a genomikus profilalkotás egyik sarokkövévé vált. A sejtvonal megőrizte a vad típusú TP53 funkcióját – ami az osteosarcoma-sejtvonalak között viszonylag ritkaságnak számít –, így különösen értékes a p53-függő jelátviteli útvonalak, a DNS-károsodásra adott válaszok és a cirkadián ritmus szabályozásának vizsgálatához. Az omikai adatkészletek kiterjedt gyűjteményével és több száz publikált tanulmánnyal az U2OS továbbra is az egyik leggyakrabban hivatkozott és legjobban jellemzett emberi rákmodell, amely az orvostudományi kutatók rendelkezésére áll.

Főbb tanulságok

• Az U2OS (Cellosaurus, CVCL_0042 azonosítószám) egy emberi osteosarcoma sejtvonal, amelyet az 1960-as évek közepén a sípcsont szövetéből állítottak elő, és amelyet először 1967-ben írtak le.
• A sejtvonal vad típusú TP53-at hordoz, ami miatt előnyös modellnek számít a p53-függő sejtciklus és a DNS-károsodás vizsgálatához.
• Az U2OS sejtek adhezív, epiteliális morfológiájú monorétegként szaporodnak; a megadott sejtduplázódási idő körülbelül 25–30 óra (DSMZ ACC-785) és 36 óra (Mohseny et al.) között mozog.
• A sejtvonalat átfogóan jellemezték a genomika, a transzkriptomika, a proteomika és a gyógyszerszűrési adatkészletek alapján, beleértve a Ráksejtvonal-enciklopédiát is.
• Az U2OS platformként szolgált több száz olyan módosított sejtvonal számára, amelyeket GPCR-vizsgálatokban, fluoreszcens jelzőfehérje-vizsgálatokban és CRISPR-alapú funkcionális szűrésekben használtak.
• A jelenlegi kutatási területek között szerepel az osteosarcoma elleni gyógyszerfejlesztés, a DNS-javítási mechanizmusok, a cirkadián biológia, az endocitózis és az anyagcsere-átprogramozás.

Mi az a U2OS?

Az U2OS-t egy 15 éves, osteosarcomában szenvedő női beteg sípcsontjából nyerték ki. A sejtvonalat az 1960-as évek közepén hozták létre, és először Pontén és Saksela számolt be róla 1967-ben. [1], majd ezt követően a rákkutatás céljából az emberi tumorsejtvonalak közé sorolták [2]. A korai immunológiai jellemzés megerősítette, hogy nincs HeLa-sejt-szennyeződés [3] és meghatározták a sejtvonal HLA-antigénprofilját [4] [5]. A sejtvonal adhezív monorétegként növekszik, epiteliális morfológiával. A közölt duplázódási idők forrásonként eltérőek: a DSMZ-katalógusbejegyzés (ACC-785) szerint körülbelül 25–30 óra, míg Mohseny és munkatársai funkcionális jellemzésében körülbelül 36 óra. [13] [61]. Ezt a sejtvonalat közepesen differenciált osteosarcoma-vonalnak sorolják, amely megőrizte a vad típusú TP53-at, ami megkülönbözteti más osteosarcoma-vonalaktól, például a Saos-2-től, amelyben a p53 expressziója teljesen hiányzik. Az összehasonlító jellemzés kimutatta, hogy az U2OS sejtek a legtöbb klasszikus osteoblastikus markert nem fejezik ki, ami tükrözi viszonylag differenciálatlan állapotukat az érettebb osteosarcoma sejtvonalakhoz képest. [6]. A vonal mikroszatellit-stabil (MSS), és egy heterozigóta PPM1D-trunkációs variánst hordoz (p.Arg458Ter, c.1372C>T), amelyet az U2OS esetében a Cellosaurus és a DepMap adatbázisokban is rögzítettek (ACH-000364) [61]. Ezen C-terminálisan csonkított, funkciófokozó PPM1D-allélcsoport funkcionális következményét — a p53-függő G1-ellenőrzőpont károsodását — Kleiblova és munkatársai írták le. [7].

A komparatív genomikus hibridizációval végzett kromoszómaelemzés komplex genomikus eltéréseket tárt fel az osteosarcoma-sejtvonalakban, beleértve az U2OS-t is, átlagosan 20,8 eltéréssel vonalonként (10–31 közötti tartományban) [8]. A nagy felbontású array CGH-vizsgálat további rejtett mikroaberrációkat tárt fel, és a vizsgált négy osteosarcoma-vonal közül az U-2 OS-ben volt a legkevesebb ilyen esemény – hat, ami a panelben a legalacsonyabb előfordulási gyakoriság –, ami összhangban áll a TP53-gén vad típusú háttérjével, míg a TP53-mutáns SAOS-2-ben 17 ilyen esemény volt [9]. Az EuroBoNeT konzorcium keretében elvégzett molekuláris jellemzés megerősítette az U2OS TP53-génjének vad típusú állapotát, és azonosította a homozigóta CDKN2A-deléciót, mint a csontdaganat-panel egészében a leggyakoribb eseményt (36 vonalból 15), amely szorosan összefügg a p16 fehérje hiányával; a Cellosaurus adatbázisban maga az U2OS esetében nem szerepel CDKN2A-deléció. [10] [61]. A p53 gén átrendeződéseit elsődleges osteogén szarkómákban és a hozzájuk kapcsolódó sejtvonalakban is dokumentálták [11], és kimutatták, hogy a vad típusú p53 túltermelése gátolja az osteosarcoma-sejtek szaporodását [12], ami aláhúzza az U2OS-modell jelentőségét a p53-útvonal kutatásában. Funkcionális vizsgálatok igazolták, hogy az U2OS-sejtek szubkután injekció beadása után in vivo daganatokat képeznek, ami megerősíti alkalmazhatóságukat reprezentatív osteosarcoma-modellként [13].

Sejtkultúrával kapcsolatos információk

Az U2OS sejtek előnyei

Az U2OS egyik legjelentősebb előnye a vad típusú TP53 megőrzése. Ez a tulajdonság miatt a sejtvonal ideális a p53-függő folyamatok – többek között a DNS-károsodási ellenőrzőpontok, a sejtciklus-leállás, az apoptózis és a genotoxikus stresszre adott transzkripciós válaszok – vizsgálatához. Mivel számos osteosarcoma- és ráksejtvonal hordoz p53-mutációkat, az U2OS kritikus rést tölt be csontdaganat-modellként, amelyben a p53-útvonal farmakológiája a funkcióvesztéses mutációk zavaró hatása nélkül értékelhető. Az MDM2-antagonisták jól illusztrálják, miért fontos ez a különbség. Egy szarkóma-sejtvonalakból álló panelben az MDM2-antagonista Nutlin-3A stabilizálta a p53-at, és hatékonyan indukálta a p53-függő transzkripciót és az apoptózist az amplifikált MDM2-t hordozó vonalakban; a vad típusú TP53-mal rendelkező, de MDM2-amplifikáció nélküli vonalakban – amely konfiguráció az U2OS-ban is megtalálható – némi válasz volt megfigyelhető a Nutlin-ra, de az apoptózis nem indult be [14]. A p53-funkcióval rendelkező csontdaganat-modell tehát lehetővé teszi, hogy a p53-státusz és az MDM2-dózis hatását egymástól függetlenül, egymástól elkülönítve vizsgáljuk, anélkül, hogy azok hatása egymást befolyásolná.

Az U2OS sejtek lapos, adhezív epiteliális morfológiájuknak és viszonylag nagy sejtmagjuknak köszönhetően kiválóan alkalmasak élősejt-mikroszkópos vizsgálatokra és fluoreszcens jelzőanyag-vizsgálatokra. Ezek a tulajdonságok több száz génmódosított sejtvonal kifejlesztéséhez vezettek — többek között U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP sejtek valamint számos PathHunter- és LanthaScreen-változat, amelyek mindegyike a CVCL_0042 alelemeként szerepel a katalógusban [61] — amelyek kihasználják a szülői vonal transzfektálhatóságát és optikai átlátszóságát. A sejtvonal emellett számos jelentős genomikai és proteomikai profilalkotási kezdeményezés részét képezi, ideértve a Cancer Dependency Map projektet (DepMap ACH-000364, amely magában foglalja a Cancer Cell Line Encyclopedia-t) és a Human Protein Atlas sejtatlasz-panelt is, így a kutatók számára gazdag háttéradatkészleteket biztosít, amelyekhez viszonyítva értékelhetik a kísérleti eredményeket. [15] [16] [61].

A vonal rendkívül alkalmasnak bizonyult a genetikai manipulációra: támogatja a stabil és átmeneti transzfekciót, a CRISPR-Cas9 génszerkesztést, az RNAi-alapú géncsendesítést és a vírusos transzdukciót. Az exogén konstrukciók hatékony integrációja és a robusztus növekedési kinetika miatt ez a vonal a nagy áteresztőképességű szűrőplatformok praktikus alapja. Az U2OS-sejtekben 5 259 gyógyszerre vonatkozó „Cell Painting” profilok a kémiai biológia egyik legnagyobb morfológiai referencia-adatkészletét alkotják, és ezeket termikus proteom-profilozással kombinálták a vegyületek hatásmechanizmusának nagyméretű feltárása érdekében. [17]. Ez a széles körű alkalmazhatóság — amely kiterjed a csontrák biológiájára, az alapvető sejtbiológiára és a gyógyszerfejlesztésre — alapozza meg az U2OS tartós népszerűségét.

Az U2OS-sejtek korlátai

Számos erőssége ellenére az U2OS kromoszómális komplexitást mutat, ami megnehezítheti az eredmények értelmezését. Nyolc osteosarcoma-sejtvonalon végzett összehasonlító genomikus hibridizáció során sejtvonalonként átlagosan 20,8 kromoszómális aberrációt tártak fel, az U2OS esetében pedig több régióban is kromoszómagombák és -veszteségek voltak megfigyelhetők. [8]. A PPM1D gén heterozigóta, funkciót fokozó, trunkaált variánsa (p.Arg458Ter) károsítja a p53-függő G1-ellenőrzőpontot, ami azt jelenti, hogy bár a p53 jelen van és szekvenciaszinten vad típusú, a gén által kiváltott jelátvitel részben gyengül [7] [61]. A p53-útvonal farmakológiájának pontos vizsgálatával foglalkozó kutatóknak az eredmények értelmezésekor figyelembe kell venniük ezt a módosító tényezőt.

Mivel az U2OS egy közepesen differenciált osteosarcoma-sejtvonal, nem ad hű képet az érett osteoblastikus fenotípusról. Az immuncitokémiai jellemzés kimutatta, hogy a legtöbb osteoblastikus markernél negatív eredményt ad, ellentétben az érettebb SaOS-2 sejtek sor [6]. Azok a kutatások, amelyek megbízható csontképző differenciálódási markerekre vagy mineralizációs reakciókra támaszkodnak, ezért úgy találhatják, hogy az U2OS nem elég reprezentatív a késői stádiumú oszteoblasztok biológiájának leírására. Ezen felül – mint minden bevett sejtvonal esetében – az U2OS is felhalmozott olyan ex vivo adaptációkat, amelyek nem feltétlenül tükrözik hűen az elsődleges daganat biológiáját, különösen a stroma-interakciók és a háromdimenziós felépítés tekintetében [13].

Az U2OS hosszú távú tenyésztése – akárcsak bármely más sejtvonal esetében – magában hordozza a genetikai sodródás és az alklónok közötti fenotípusbeli eltérések kockázatát. A laboratóriumok közötti reprodukálhatóság biztosítása érdekében erősen ajánlott a rövid tandem-ismétlődés-profil alapján történő hitelesítés. [18]. A kutatóknak azt is figyelembe kell venniük, hogy az U2OS a klasszikus osteoblastikus extracelluláris mátrixfehérjéknek csupán egy részét fejezi ki, ami korlátozza annak alkalmazását olyan csontmikrokörnyezeti vizsgálatokban, amelyek az I-es típusú kollagénre vagy más érett osteoblastok által termelt anyagokra támaszkodnak.

A teljes műszaki adatok megtekintése és megrendelés

Alkalmazások

Osteosarcoma gyógyszerkifejlesztés és terápiás szűrés

Az U2OS az osteosarcoma elleni új és átalakított vegyületek értékelésének elsődleges modellje. Különböző természetes és szintetikus hatóanyagok daganatellenes hatását vizsgálták ezen sejtvonalon. A Curcin C, egy I. típusú riboszómát inaktiváló fehérje, amelyet csírázás után nyertek ki a Jatropha curcas magokból, kimutatták, hogy gátolja az U2OS sejtek szaporodását ROS-közvetített apoptózis, autofágia, valamint az S és a G2/M fázisban történő leállás révén; a hatást a JNK jelátvitel aktiválásának és az ERK útvonal gátlásának tulajdonították; a ROS-elnyelő NAC és a JNK-gátló SP600125 egyaránt tompította a választ, alátámasztva a javasolt kaszkádot [53]. Egy későbbi tanulmány kimutatta, hogy a Curcin C-nek a Curcinhez viszonyított nagyobb hatékonysága az U2OS-sejtekben nagyrészt az LRP1-közvetített, klatrin-függő endocitózissal magyarázható, amely a Curcin C számára elérhető, a Curcin számára viszont nem.

Az aloperin, egy alkaloid természetes anyag, gátolta mind az MG-63, mind az U2OS osteosarcoma sejtek proliferációját és klonogenitását, apoptózist indukált – amit áramlási citometriával is megerősítettek –, valamint gátolta az inváziót karcolásos és transwell-tesztekben, az MMP-2, MMP-9, PI3K és p-AKT1 kifejeződésének csökkenésével [54]. Ez a tanulmány rávilágított a természetes alkaloidok által a növekedést és a metasztatikus potenciált egyidejűleg gátló, egymásba torkolló útvonalakra. Ettől függetlenül kimutatták, hogy a természetes édesítőszer-metabolit, a steviol dózis- és időfüggő módon gátolja az U2OS-sejtek szaporodását; a mechanizmus vizsgálata során kiderült, hogy a sejtciklus G1-fázisában leállás következik be, és a Bax/Bcl-2 arány növekedése a mitokondriális apoptotikus útvonalra utal [55] — ezek az eredmények a természetes metabolitokat az osteosarcoma kemoprevenciójának kutatásában potenciális jelölteknek minősítik.

A tanninsav fokozta a ciszplatin citotoxikus hatását az U2OS-sejtekben, de a kölcsönhatás erősen arányfüggőnek bizonyult: szinergiát figyeltek meg 90:10 és 85:15 tanninsav–ciszplatin arányoknál, míg a 75:25 és 50:50 arányok antagonisztikus hatást mutattak, és a tanninsav önmagában nem gátolta szignifikánsan a normál hFOB 1.19 osteoblastokat [56]. Bármely polifenol-alapú szenzibilizációs stratégia ezért a egyszerű együttes adagolás helyett a dózisarány gondos optimalizálásától függ. A galluszsav hasonlóképpen fokozta az olaparib által kiváltott sejthalált és enyhítette az olaparib iránti szerzett rezisztenciát az U2OS sejtekben és egy olaparib-rezisztens származékban (U2OS-PIR), gátolva az angiogenezist és modulálva a cPARP-t, a Bcl-2-t és a Bax-ot [57], ezzel bővítve az osteosarcoma kezelésének kutatásában alkalmazható természetes vegyületkombinációk repertoárját. A lenvatinib, egy jóváhagyott multikináz-gátló, a p-STAT3/p53/xCT tengelyen keresztül ferroptózishoz kapcsolódó változásokat váltott ki az U2OS- és 143B-sejtekben, feltárva egy új mechanizmust, amelyen keresztül ez a szer az osteosarcoma progresszióját a kanonikus angiogenezis-gátló szerepén túl is gátolhatja [19]. A természetes gyilkossejtekre (NK-sejtekre) alapuló immunterápiát egy csontszarkóma-sejtvonalakból álló panel, beleértve az U2OS-t is, esetében értékelték; ekkor az NKG2D-ligand expressziója korrelált az NK-sejtek által közvetített elpusztítási hatékonysággal, míg az aeroszolos interleukin-2 in vivo javította a szervspecifikus NK-sejt-aktivitást [20].

Egy szélesebb körű, 63 emberi sejtvonalat és több mint 400 onkológiai vegyületet magában foglaló szarkóma-gyógyszerszűrés dokumentálta az U2OS gyógyszerérzékenységi profiljait a gén- és mikroRNS-expressziós adatokkal együtt, így gazdag farmakogenomikai referenciát biztosítva a terület számára [21]. A mérföldkőnek számító Cancer Cell Line Encyclopedia projekt közel 950 sejtvonal – köztük az U2OS – génkifejeződési, kópiaszám- és szekvenálási adatait integrálta, és ezeket a gyógyszerérzékenységi profilokkal korrelálta a terápiás válaszra vonatkozó prediktív biomarkerek azonosítása érdekében [15]. Egy ezt követő farmakogenomikai áttekintő tanulmány több mint 1000 annotált sejtvonalon feltérképezte a gyógyszerérzékenységi összefüggéseket a rák által kiváltott változásokkal, tovább kontextualizálva az U2OS-reakciókat a tágabb onkológiai térben [22].

A miR-16-1-3p/MDM2/p53 tengely az osteosarcomában a TGF-β1 jelátvitel kimenetének fontos szabályozójaként került előtérbe. Xue és munkatársai kimutatták, hogy a miR-16-1-3p túltermelése jelentősen csökkentette az U2OS-sejtek proliferatív és klonogén potenciálját, míg a TGF-β-kezeléssel való kombinációja erőteljesen fokozta a G1-fázisban való leállást, és szinte teljesen megszüntette a tumor növekedési képességét [23]. Ugyanez a tanulmány kimutatta, hogy a miR-16-1-3p gátolta a TGF-β által kiváltott aktin-átalakulást és az epiteliális-mezenchimális átalakulással összefüggő változásokat, és hogy a közös adagolás növelte a ciszplatinra való érzékenységet a vad típusú U2OS sejtekben, valamint csökkentette a daganati csomók térfogatát és a metasztázisokat a csirke korioallantois membrán modelljében, mechanisztikus betekintést nyújtva abba, hogy ez a mikroRNS hogyan gátolja a TGF-β jelátvitel metasztázis-elősegítő ágát. Kimutatták, hogy az oszteoblastokból származó extracelluláris vezikulák (OB-EV-k) vonalfüggő módon módosítják az oszteoszarkóma-sejtek viselkedését: az U2OS-ban csökkentették az anyagcserét (1,30-szeresre) és a proliferációt (1,70-szeresre), miközben fokozódott az apoptózis (1,15-szeresre), míg az MG-63-ban a proliferáció 4,9-szeresére nőtt. A kísérő transzkriptomikai profilozást MNNG/HOS sejtekben végezték, ahol 296 gén expressziója eltérő volt, és a szerzők a mikroRNS-transzportot javasolják potenciálisan közreható mechanizmusként, amelynek funkcionális validációjára azonban még szükség van [24]. Az osteosarcomában végbemenő metabolikus átprogramozást egysejtes transzkriptomikával vizsgálták, és azonosították a Stanniocalcin-2 (STC2)-t, mint a glikolízis központi szabályozóját, amelynek funkcionális validálására MG-63- és U2OS-sejtekben került sor a Seahorse extracelluláris fluxuselemzés segítségével [25].

DNS-javítás, sejtciklus-szabályozás és DNS-károsodásra adott válasz

Az U2OS az egyik legszélesebb körben használt modell a DNS-javítás kutatásában, elsősorban azért, mert vad típusú p53-háttérrel rendelkezik, ami lehetővé teszi a p53-függő károsodási válaszok teljes spektrumának vizsgálatát. Egy genomszintű tanulmány feltérképezte az U2OS sejtciklus által szabályozott transzkriptomját, és több szinkron sejtcikluson keresztül 2 140 periodikusan expresszálódó transzkriptet azonosított, amelyek 1 871 egyedi génnek felelnek meg [52]. A G2/M transzkripciós faktor, a FOXM1 esetében végzett ChIP-seq és az E2F1, E2F4, E2F6, GABPA és a DREAM-komplexre vonatkozóan a szerzők kimutatták, hogy a FOXM1 erőteljesen aktiválja a G2/M-fázisú gének promótereit, míg az S-fázisban indukáltakat csak gyengén aktiválja, és hogy az U2OS és a HeLa sejtek között közös sejtciklus-gének magját több sejtciklus-transzkripciós faktor is megköti. Az adatkészlet az U2OS-t a sejtciklus transzkriptomjának feltérképezésére szolgáló második, függetlenül jellemzett emberi modellként határozta meg, és továbbra is széles körben használt referencia marad az emberi sejtosztódási ciklus génszabályozási vizsgálataihoz.

A PPM1D/Wip1-ben – a p53-at inaktiváló foszfatázban – előforduló funkciót fokozó mutációk C-terminálisan csonkított, hiperaktív Wip1-et eredményeznek, és károsítják a p53-függő G1-ellenőrzőpontot DNS-károsodás után; Az U2OS heterozigóta módon hordoz egy ilyen csonkító allélt (p.Arg458Ter) [7] [61]. Ez az U2OS-t hasznos modellé teszi annak vizsgálatához, hogy a Wip1-csonkítások hogyan biztosítanak szelektív növekedési előnyt a DNS-károsodásra adott válasz gyengítésével. A DNS-károsodásra adott válasz egyedi sejtek közötti variabilitását 2 Gy fotonoknak kitett U2OS-sejtekben számszerűsítették; a kétmagvú sejtek testvérmagjaiban található 53BP1- és γH2AX-fókuszok összehasonlításával Płódowska és munkatársai kimutatták, hogy a javító fókuszok kialakulásában sejtről sejtre változó sztochasztikus zaj figyelhető meg, amely a véletlenszerűen eloszló DNS-károsodásra rakódik rá; ez a zaj a 53BP1-fókuszok teljes variabilitásának 28%-át, a γH2AX-fókuszoké pedig 50%-át tette ki [26]. A lágy szöveti szarkóma sejtvonalakban – beleértve az U2OS kontrollokat is – végzett testvérkromatid-csere-elemzés megerősítette, hogy az endogén γH2AX-képződés korrelál a genomikus instabilitással, és előre jelezheti a DNS-károsító kezelésekre adott válaszokat [27].

U2OS-sejteket használtak a Huntington-kórban előforduló szomatikus CAG-ismétlődés-expanzió vizsgálatához. Az MSH3 Y245/K246 IDL-kötőzseb genetikai megzavarása jelentősen csökkentette a DNS-kölcsönhatást és megakadályozta a ismétlődés-expanziót egy mutáns HTT 1. exont expresszáló U2OS-vonalban, míg ugyanazon hely farmakológiai blokkolása csökkentette az ismétlődés-expanziót az U2OS-ban, és – ami fontos – lassította az expanziót a Huntington-kórban szenvedő betegek iPSC-jeiből származó közepes tüskés neuronokban is [28]. Az U2OS DR-GFP származékvonalat széles körben használják homológ rekombinációs javítási vizsgálatokhoz, és számos knockout származékot – beleértve a RAD52, TBK1 és OPTN knockoutokat – hoztak létre a specifikus javítási útvonal komponenseinek elemzésére, amelyeket mind a CVCL_0042 [61] alelemeként szerepelnek. A TSC2 tumor szuppresszort stresszgránulátum-szuppresszorként azonosították; a munkát ismertető előzetes publikációban az U2OS sejtekben a TSC2 siRNA-val történő részleges csökkentése nem váltott ki spontán stresszgránulákat, ellentétben az egér embrionális fibroblasztokban megfigyelt teljes elvesztéssel, ami a TSC2-t a stresszgránulák összeállításának küszöbérték-függő szabályozójává tette [29]. A rákos sejtvonal-panelekben végzett, homozigóta deléciókra és polaritáskomplex-génmegszakításokra irányuló genomszintű szűrések szintén beépítették az U2OS-adatokat, hozzájárulva a recesszív rákgének és a törékeny helyek jellemzőinek azonosításához [30] [31].

Circadián biológia és génreguláció

Az U2OS az emlősök cirkadián órájának kutatásában vezető modellé vált. A sejtek robusztus, önfenntartó cirkadián ritmust mutatnak, és rutinszerűen használják őket óra-gén luciferáz-riporterekkel valós idejű luminometriához. Burke és munkatársai az óra-gén luciferáz-riportereket expresszáló U2OS-sejteket használták annak kimutatására, hogy a koffein dózisfüggő módon meghosszabbítja a cirkadián periódust, és farmakológiai elemzéssel, valamint siRNA-knockdown segítségével megállapították, hogy a hatásért az adenozinreceptor-jelátvitel – és nem a rianodinreceptor vagy a foszfodiészteráz-aktivitás – felelős [59]. Ugyanez a rendszer nagy léptékű kémiai szűrést is lehetővé tesz: a meglévő gyógyszerek nagy áteresztőképességű szűrése U2OS-sejtekben azt mutatta, hogy körülbelül 5%-uk megváltoztatta a cirkadián periódust, azonosítva a dehidroepiandroszteront mint a periódust rövidítő vegyületet, és az ABL1, ABL2 és a BCR-kináz szerepét jelölve a periódus szabályozásában [60]. Ezeket a tulajdonságokat széles körben kihasználták a BMAL1/CLOCK transzkripciós-transzlációs visszacsatolási hurok alapvető molekuláris mechanizmusainak, valamint az onkogén útvonalakkal való kölcsönhatásainak jellemzésére.

Egy közelmúltbeli előzetes publikáció a c-MYC endogén cirkadián jellegét vizsgálta U2OS sejtekben. Egy c-MYC-riporter létrehozásával és annak oszcillációs fázisának a BMAL1- és PER2-riporterekkel való összehasonlításával Kalyanaraman és munkatársai arról számoltak be, hogy a c-MYC-promóter ritmikusan oszcillál az U2OS-sejtekben – amelyek eredendően alacsony MYC-szinttel rendelkeznek – és fáziseltérésben oszcillál a központi óra komponenseihez képest [32]. Ezen eredményekre épülő számítógépes modell arra utalt, hogy a MYC az óra működését zavaró tényezőként működik, amelynek időzítése minimalizálja a cirkadián időmérésre gyakorolt negatív hatását – ez az eredmény fontos következményekkel jár annak megértése szempontjából, hogy az onkogén MYC túltermelése hogyan zavarja meg a cirkadián fiziológiát. Mivel ez a munka előzetes nyomtatvány formájában jelent meg, még nem zárult le a szakértői bírálata. Mindazonáltal jól példázza, hogy az U2OS sejtvonal alkalmas az onkogén funkció és a cirkadián szabályozás egyidejű vizsgálatára.

Az U2OS telomeráz-negatív, és telomerjeit az alternatív telomerhosszabbítás (ALT) révén tartja fenn, amely egy rekombináció-alapú mechanizmus, amelyet először Bryan és munkatársai [58] dokumentáltak bizonyos daganatok és daganatból származó sejtvonalak egy alcsoportjában. Ez az U2OS-t az ALT-kutatás standard modelljévé teszi, amely mechanizmus bizonyos rákfajtákban – többek között az osteosarcomákban – is aktív. A sejtvonalat emellett gyakran alkalmazzák a hisztonmódosítások dinamikájának, a sejtmag felépítésének és a kromatin szerveződésének vizsgálatában is, kihasználva nagy sejtmagjait és optikai vizsgálhatóságát. A fluoreszcens jelöléssel ellátott hiszton- és magpor-származékok – beleértve az U2OS EGFP-H2B-t és az U2OS-ból származó, CRISPR-jelöléssel ellátott számos NUP96 vonalat – lehetővé tették a kromatin és a magbeli transzportfolyamatok nagy térbeli felbontású kvantitatív képalkotását [61].

Endocitózis és intracelluláris transzport

Az U2OS a klatrin-mediált endocitózis (CME) és a dinamin GTPáz-aktivitás vizsgálatának standard modelljévé vált, köszönhetően erőteljes receptor-internalizációs aktivitásának és alkalmasságának a transzferrin-Alexa594 felvételét mérő kvantitatív, fluoreszcencia-alapú CME-vizsgálatokhoz. A szulfonadin-vegyületek sorozatát — a dansil-kadaverin-analógokból származó aril-szulfonamidokat — GTP-kompetitív dinamin I és dinamin II gátlókként jellemezték, az U2OS-sejteket elsődleges CME-vizsgálati platformként felhasználva [33]. A rendszerben végzett Michaelis–Menten-kinetikai elemzés megerősítette a gátlás mechanizmusát, és a leghatásosabb analóg állatmodellekben antiepileptikus hatást is mutatott, így az U2OS-alapú CME-vizsgálatok a neurológiai gyógyszerkutatás transzlációs eszközévé váltak.

Ettől függetlenül a tengeri eredetű hidroxi-kinon-szeszkviterpén, a bolinaquinon és a kapcsolódó naftokinon-analógok CME-gátló aktivitását értékelték U2OS-sejtekben; a sűrűségfunkcionális elmélet alapján végzett szerkezeti optimalizálás eredményeként olyan analógok születtek, amelyek hatékonysága jelentősen javult mind a dinamin GTPáz, mind a CME ellen [34]. Ezek a tanulmányok szemléltetik, hogy az U2OS-alapú CME-vizsgálatok hogyan szolgálnak érzékeny és reprodukálható platformként az endocitózis-gátlók szerkezet-hatás összefüggéseinek vizsgálatához. A sejtvonal konzisztens receptor-expressziója és kiszámítható internalizációs kinetikája miatt ez a sejtrendszer előnyös választásnak bizonyul e kutatási osztály számára.

Az antiszenz oligonukleotidok (ASO-k) sejtbe jutást követő sorsát U2OS-sejtekben követték nyomon élősejt-mikroszkópiával, aránymérő pH-mérésekkel és háromdimenziós fókuszált ionsugár-letapogató elektronmikroszkópiával. E munkát ismertető előzetes publikációban Sitarska és munkatársai kimutatták, hogy még olyan körülmények között is, amikor a cél-RNS mennyisége több mint 90%-kal csökkent, a belsővé vált ASO-k kevesebb mint 4%-a jutott el a sejtmagba, és hogy az ASO-k a késői endoszómákban, az endolizoszómákban és a lizoszómákban halmozódtak fel, ahol galektin-3 toborzása vagy a korlátozó membrán felszakadása nélkül indukálták a luminalis semlegesítést [35]. A szerzők azt feltételezik, hogy a hatékony elkerülés inkább az endocitózis korai szakaszában történik, valószínűleg a korai vagy újrahasznosító endoszómákban. U2OS-sejteket használtak egy GLP-1R-aktivációs vizsgálatban is – egy cAMP-érzékeny Nomad-bioszenzorokat expresszáló U2OS-vonalat –, hogy értékeljék egy foszfolipid-alapú bergamottkivonat metabolikus hatásait, ezzel bizonyítva a vonal hasznosságát génmódosított receptor-expressziós platformként a természetes termékek farmakológiájában [36]. A mitokondriális DNS-mutációk vizsgálatára szolgáló cibrid-technológiát továbbfejlesztették azáltal, hogy a HCT116, HT1080 és U2OS sejtvonalak újonnan kifejlesztett, mtDNS-mentes (ρ0) származékait validálták transzmitochondriális cibridek előállítására szolgáló befogadó sejtvonalakként [37].

Proteomika, genomika és multi-omika platformok

Az U2OS kulcsfontosságú referenciasejtvonal volt a nagyszabású proteomikai kezdeményezésekben. Az U2OS első dedikált proteomprofilját Niforou és munkatársai állították elő kétdimenziós gélelektroforézissel, MALDI tömegspektrometriával összekapcsolva: két 2-DE gélből körülbelül 3000 foltot vágtak ki és elemeztek, ami 237 különböző géntermék azonosítását eredményezte, köztük 11 olyan protoonkogént, amelyek a vonal rákos állapotához kapcsolódnak [16]. Későbbi, tömegspektrometrián alapuló kutatások számszerűsítették ennek a vonalnak az abszolút proteomját interfázisban és mitózisban — amelyet a publikációban általánosan használt emberi sejtvonalaként írtak le, és a Cellosaurus adatbázisban az U2OS-hoz rendeltek —, és kimutatták legalább körülbelül 10 000 fehérje expresszióját, amelyek sejtbeli gyakoriságukban hét nagyságrendet ölelnek fel, sejtenként akár 20 millió példányig terjedő tartományban [38] [61]. Tizenegy gyakori sejtvonalon végzett összehasonlító proteomikai vizsgálat kimutatta, hogy az U2OS-nak van egy mindenütt expresszálódó fehérjékből álló magja, miközben a funkcionális alcsoportokban sejttípus-specifikus variációt mutat [39].

A Cell Surface Capture technológiát alkalmazó, nagyszabású sejtfelszíni proteomikai vizsgálat az U2OS felszíni fehérjéinek összességét (surfaceome) 40 egyéb emberi sejttípus mellett (összesen 41 emberi és 31 egér sejttípus) katalogizálta, ezzel forrásul szolgálva a farmakológiailag elérhető felszíni célpontok azonosításához [40]. A rákimmunterápia célpontjainak fejlesztését támogató HLA-tipizálási és neoepitóp-előrejelzési tanulmányokba bevonták az U2OS-t [41] [42]. Több mint 650 rákos sejtvonal fordított fázisú fehérje-array jellemzése magában foglalta az U2OS-t is, bizonyítva, hogy a foszfoproteomikai adatok a gyógyszerérzékenységre vonatkozóan olyan prediktív képességet nyújtanak, amely meghaladja a kizárólag mRNS-mérésekből nyerhető információt [43]. A 949 sejtvonalat lefedő, minden rákfajtára kiterjedő proteomikai térkép tovább integrálta az U2OS proteomikai adatait a CRISPR-alapú esszencialitási szűrésekkel és a gyógyszerre adott válaszadatokkal, feltárva ezreknyi, a rák sebezhetőségét jelző fehérje-biomarkert [44].

675 rákos sejtvonal transzkriptom-szintű jellemzése RNS-szekvenálással katalogizálta a génfúziókat, a mutációs szignatúrákat és a nem emberi szekvenciák expresszióját az U2OS-ban [45]. A következő generációs CCLE-jellemzés kiterjesztette a profilalkotást, hogy magában foglalja a DNS-metilációt, a hisztonmódosításokat, a mikroRNS-expressziót és az RNS-szerkesztési adatokat 1 072 vonalon, az U2OS pedig hozzájárult a gyógyszerreakciókat alátámasztó molekuláris jellemzők integrált elemzéséhez [46]. A CCLE-panel kvantitatív proteomikai elemzése fehérje szinten azonosított olyan jelátviteli rendellenességeket, amelyek a genomikus vagy transzkriptomikus adatokból önmagukban nem voltak nyilvánvalóak [47]. A sejtfestés és a termikus proteomprofilozás kombinációja U2OS-sejtekben hatékony stratégiát bizonyított a gyógyszerek hatásmechanizmusának kikövetkeztetésére a morfológiai profilozás és a torzításmentes fehérje-célpont-detektálás integrálásával [17]. Az U2OS proteomikai adatkészletekre a viromszintű minőség-ellenőrzés is kiterjed: általános szűrési lépésként kifejlesztettek egy xenoproteomikai munkafolyamatot a proteomikai adatokban található vírusfehérjék célzott detektálására, és a szerzők azt javasolják, hogy minden sejtproteom-adatkészletet publikálás előtt vizsgáljanak meg nem emberi fehérjék jelenlétére [48]. Az U2OS-t bevonó, osteosarcoma-ra irányuló integratív epigenomikai elemzés 350 olyan gént azonosított, amelyeknél a genetikai és epigenetikai eltérések egybeestek, elősegítve ezzel a csontdaganat progresszióját szabályozó mechanizmusok jobb megértését [49]. A fehérjeexpressziót sejtmikroarray-ekben is értékelték agaróz-mátrixba ágyazott U2OS-sejtek felhasználásával, ami lehetővé tette több sejtvonal egyidejű profilozását szöveti mikroarray formátumban [50]. Az U2OS-sejtek korai marker-válaszát egy hialuronsavval bevont xenogén csontgraft kivonataira qRT-PCR-rel jellemezték: a RUNX2 expressziója 2,61-szeresére emelkedett (p = 0,01), míg a COL1A1 esetében nem jelentettek szignifikáns hatást, és az anyagcsere-aktivitásban megfigyelt különbségek az FDR-korrekció után már nem maradtak szignifikánsak [51]. A szerzők a tanulmányt feltáró jellegűnek minősítik, és elsődleges sejtekben, valamint in vivo modellekben történő validálásra szólítanak fel.

Következtetés

Az U2OS (CVCL_0042) egy rendkívül sokoldalú humán osteosarcoma sejtvonal, amely alapvető előrelépésekhez járult hozzá a csontdaganatok kutatásában, a DNS-javítási biológiában, a cirkadián ritmus tudományában, az endocitózis farmakológiájában és a nagyméretű omikális profilalkotásban. Vad típusú TP53-háttérrel, adhezív epiteliális morfológiával, gyors duplázódási idővel és mélyreható multi-omikai jellemzéssel rendelkezik, ami kivételesen jól alátámasztott kísérleti modellé teszi. A korai HLA-tipizálási vizsgálatoktól a mai CRISPR-alapú funkcionális szűrésekig és a „Cell Painting” gyógyszerprofilozásig az U2OS folyamatosan alkalmazkodott az orvostudományi kutatói közösség igényeihez. Azok a kutatók, akik megbízható, széles körben dokumentált modellt keresnek az osteosarcoma biológiájához, a sejtciklus szabályozásához, a DNS-károsodásra adott válaszhoz vagy a nagy áteresztőképességű vegyületszűréshez, az U2OS-t nélkülözhetetlen eszköznek fogják találni. Fedezze fel a teljes specifikációt, vagy rendelje meg az U2OS sejteket közvetlenül a cytion.com oldalon.

Főbb publikációk

1. Pontén J, Saksela E (1967) Két létrehozott in vitro sejtvonal emberi mezenchimális daganatokból. International Journal of Cancer. PMID: 6081590
2. Fogh J (1986) Emberi tumorsejtvonalak a rákkutatás számára. Cancer Investigation. PMID: 3518877
3. Fogh J, Wright WC, Loveless JD (1977) A HeLa-sejtekkel való szennyeződés hiánya 169 emberi daganatból származó sejtvonalban. Journal of the National Cancer Institute. PMID: 833871
4. Espmark JA, Ahlqvist-Roth L, Särne L (1978) Tenyésztett sejtek szöveti tipizálása. III. Megállapított humán sejtvonalak HLA-antigénjei. Tissue Antigens. PMID: 77569
5. Pollack MS, Heagney SD, Livingston PO (1981) HLA-A, B, C és DR alloantigének expressziója negyvenhat tenyésztett emberi daganatos sejtvonalon. Journal of the National Cancer Institute. PMID: 7017212
6. Pautke C, Schieker M, Tischer T (2004) Az MG-63, Saos-2 és U-2 OS osteosarcoma sejtvonalak jellemzése emberi osteoblastokhoz viszonyítva. Anticancer research. PMID: 15736406
7. Kleiblova P, Shaltiel IA, Benada J (2013) A PPM1D/Wip1 funkciót fokozó mutációi károsítják a p53-függő G1 ellenőrzőpontot. The Journal of Cell Biology. PMID: 23649806
8. Ozaki T, Neumann T, Wai D (2003) Az osteosarcoma sejtvonalakban előforduló kromoszómális eltérések, amelyeket komparatív genomikus hibridizációval és többszínű kariotípus-elemzéssel tártak fel. Rákgenetika és citogenetika. PMID: 12645653
9. Selvarajah S, Yoshimoto M, Maire G (2007) Rejtett mikroaberrációk azonosítása az osteosarcomában nagy felbontású oligonukleotid-array-alapú összehasonlító genomikus hibridizációval. Cancer Genetics and Cytogenetics. PMID: 17981215
10. Ottaviano L, Schaefer KL, Gajewski M (2010) A csontdaganat-kutatásban általánosan használt sejtvonalak molekuláris jellemzése: egy transzeurópai EuroBoNet-kezdeményezés. Gének, kromoszómák és rák. PMID: 19787792
11. Masuda H, Miller C, Koeffler HP (1987) A p53 gén átrendeződése emberi osteogén szarkómákban. Az Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Tudományos Akadémiájának közleményei. PMID: 2823272
12. Diller L, Kassel J, Nelson CE (1990) A p53 sejtciklus-szabályozó fehérjeként működik az osteosarcomákban. Molekuláris és sejtbiológia. PMID: 2233717
13. Mohseny AB, Machado I, Cai Y (2011) Az osteosarcoma sejtvonalak funkcionális jellemzése reprezentatív modelleket nyújt az emberi betegség tanulmányozásához. Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. PMID: 21519327
14. Müller CR, Paulsen EB, Noordhuis P (2007) A liposzarkómák kezelésének lehetőségei az MDM2-antagonista Nutlin-3A alkalmazásával. International Journal of Cancer. PMID: 17354236
15. Barretina J, Caponigro G, Stransky N (2012) A ráksejtvonal-enciklopédia lehetővé teszi a rákellenes gyógyszerekre való érzékenység prediktív modellezését. Nature. PMID: 22460905
16. Niforou KM, Anagnostopoulos AK, Vougas K (2008) Az emberi osteosarcoma U2OS sejtvonal proteomprofilja. Cancer Genomics & Proteomics. PMID: 18359981
17. Johansson C, Johansson M, Kasi PB (2026) Sejtfestés és termikus proteomprofilozás a gyógyszercélpontok és a hatásmechanizmusok következtetéséhez. Molecular systems biology. PMID: 42141265
18. Yu M, Selvaraj SK, Liang-Chu MM (2015) Forrás a sejtvonalak hitelesítéséhez, annotálásához és minőség-ellenőrzéséhez. Nature. PMID: 25877200
19. Yang C, Ma Y, Shen W (2026) A lenvatinib a p-STAT3/p53/xCT tengely bevonásával ferroptózishoz kapcsolódó változásokat indukál az osteosarcoma sejtekben. Frontiers in oncology. PMID: 42294277
20. Guma SR, Lee DA, Yu L (2014) Természetes gyilkossejt-terápia és aeroszolos interleukin-2 az osteosarcoma tüdőáttéteinek kezelésére. Pediatric blood & cancer. PMID: 24136885
21. Teicher BA, Polley E, Kunkel M (2015) A szarkóma sejtvonalakon végzett onkológiai gyógyszerek és kísérleti szerek szűrése azonosítja a gének és mikroRNS-ek expressziójával összefüggő mintázatokat. Molecular Cancer Therapeutics. PMID: 26351324
22. Iorio F, Knijnenburg TA, Vis DJ (2016) A rákos megbetegedésekben fellépő farmakogenomikai kölcsönhatások áttekintése. Cell. PMID: 27397505
23. Xue W, Wang Y, Smirnova AV (2026) A miR-16-1-3p az MDM2-p53 tengelyen keresztül gátolja a proliferációt és az invazivitást a TGF-β1 jelátvitelben az osteosarcomában. Molekuláris terápia. Onkológia. PMID: 42318056
24. Giacchi L, Ucci A, Zelli V (2026) Az osteoblastokból származó extracelluláris vezikulák hatása az osteosarcoma sejtek transzkripciós profiljára: a transzportált miRNA-k szerepe. Biomedicines. PMID: 42193365
25. Hu X, Wang Q, Lin S (2026) Az egysejtes transzkriptomika feltárja a glikolitikus heterogenitást, és azonosítja az STC2-t az osteosarcoma metabolikus átprogramozásának kulcsfontosságú szabályozójaként. Molekuláris és sejtbiokémia. PMID: 42166004
26. Płódowska M, Drzazga D, Węgierek-Ciuk A (2026) A fotonsugárzásnak kitett egyes emberi sejtek DNS-károsodásra adott válaszának variációjának értékelése. Sugárzás és környezeti biofizika. PMID: 42301301
27. Salawu A, Wright K, Al-Kathiri A (2018) Testvérkromatid-csere és genomikus instabilitás a lágyrész-szarkómákban: lehetséges következmények a DNS-károsító kezelésekre adott válaszra nézve. Szarkóma. PMID: 29853780
28. Goold R, Donaldson J, Gidney F (2026) Az MSH3 Y245/K246 IDL-kötőhely genetikai vagy farmakológiai zavarása lassítja a CAG-ismétlődés kiterjedését. NAR molekuláris orvostudomány. PMID: 42317610
29. Ma Y, Farny NG (2026) A TSC2 a stresszgránulátumok gátlója. bioRxiv. Előnyomtatvány – nem szakértői bírálat alatt áll. PMID: 42239325
30. Bignell GR, Greenman CD, Davies H (2010) A mutáció és a szelekció jelei a rákgenomban. Nature. PMID: 20164919
31. Rothenberg SM, Mohapatra G, Rivera MN (2010) A mikrodeléciók genomszintű szűrése a polaritáskomplex gének megzavarását tárja fel különböző emberi rákfajtákban. Cancer research. PMID: 20215515
32. Kalyanaraman B, Ganesh D, Kunte VA (2026) A c-MYC transzkripciója cirkadián módon történik, és olyan óramegzavaróként működik, amelynek időzítése minimalizálja hatásait. bioRxiv. Előnyomtatvány – nem szakértői bírálat alatt áll. PMID: 42244582
33. Jones NC, Robertson MJ, Odell LR (2026) Sulfonadyn-vegyületek: olyan aril-szulfonamidok osztálya, amelyek gátolják a dinamin-GTPáz és a klatrin-közvetített endocitózist, és állatmodellekben antiepileptikus hatást fejtenek ki. ACS Chemical Biology. PMID: 42313002
34. O'Brien NS, Ghods A, Xue J (2025) A bolinaquinontól, egy tengeri hidroxi-kinon-szeszkviterpéntől, a klatrin-gátló hatással rendelkező naftokinonokig. RSC Medicinal Chemistry. PMID: 41884311
35. Sitarska E, Saminathan A, Scanavachi G (2026) A meztelen antiszenz oligonukleotidok a membrán károsodásának indukálása ellenére is az endolizoszómákban maradnak. bioRxiv. Előnyomtatvány — nem szakértői bírálat alatt áll. PMID: 42182263
36. Khan A, Mella RM, Villacé P (2026) Egy fenntartható, szabványosított, foszfolipid-alapú bergamott-kivonat GLP-1R-hez kapcsolódó aktivitásának in vitro értékelése. Biomedicines. PMID: 42193436
37. Weaver L, Alexeyev MF (2026) Továbbfejlesztett módszer transzmitochondriális cibridok előállítására. Cells. PMID: 42193905
38. Beck M, Schmidt A, Malmstroem J (2011) Egy emberi sejtvonal kvantitatív proteomja. Molecular systems biology. PMID: 22068332
39. Geiger T, Wehner A, Schaab C (2012) Tizenegy gyakori sejtvonal összehasonlító proteomikai elemzése a legtöbb fehérje mindenütt jelen lévő, de változó expresszióját tárja fel. Molecular & cellular proteomics. PMID: 22278370
40. Bausch-Fluck D, Hofmann A, Bock T (2015) Tömegspektrometriával létrehozott sejtfelszíni fehérjeatlasz. PloS one. PMID: 25894527
41. Boegel S, Löwer M, Bukur T (2014) Az emberi rákos sejtvonalak HLA-típusainak, HLA-expressziójának és neoepitóp-jelöltjeinek katalógusa. Oncoimmunology. PMID: 25960936
42. Scholtalbers J, Boegel S, Bukur T (2015) TCLP: egy online rákos sejtvonal-katalógus, amely integrálja a HLA-típust, a jósolt neoepitópokat, valamint a vírus- és génexpressziót. Genome medicine. PMID: 26589293
43. Li J, Zhao W, Akbani R (2017) Emberi rákos sejtvonalak jellemzése fordított fázisú fehérje-mikrochipek segítségével. Cancer Cell. PMID: 28196595
44. Gonçalves E, Poulos RC, Cai Z (2022) 949 emberi sejtvonalra kiterjedő, rákfajtákra kiterjedő proteomikai térkép. Cancer Cell. PMID: 35839778
45. Klijn C, Durinck S, Stawiski EW (2015) Emberi ráksejtvonalak átfogó transzkripciós profilja. Nature Biotechnology. PMID: 25485619
46. Ghandi M, Huang FW, Jané-Valbuena J (2019) A Ráksejtvonal-enciklopédia új generációs jellemzése. Nature. PMID: 31068700
47. Nusinow DP, Szpyt J, Ghandi M (2020) A Ráksejtvonal-enciklopédia kvantitatív proteomikája. Cell. PMID: 31978347
48. Chernobrovkin AL, Zubarev RA (2014) Vírusfehérjék kimutatása emberi sejtvonalakban xeno-proteomika segítségével: az utolsó érvényes kifogás eltávolítása, ami miatt nem vizsgálták meg minden sejtproteom-adatkészletet vírusfehérjék szempontjából. PloS one. PMID: 24618588
49. Kresse SH, Rydbeck H, Skårn M (2012) Az integrált elemzés feltárja a genetikai és epigenetikai változások közötti összefüggéseket az osteosarcomában. PloS one. PMID: 23144859
50. Andersson AC, Strömberg S, Bäckvall H (2006) A fehérjeexpresszió elemzése sejtmikroarrayeken: eszköz az antitest-alapú proteomikához. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. PMID: 16957166
51. Mayer Y, Abu Sada H, Zigdon Giladi H (2026) Osteoblaszt-szerű és csontvelő-stromális sejtvonalak korai osteogén és stromális markerválaszai egy hialuronsavval bevont xenogén csontátültetésre: feltáró in vitro elemzés. Dentistry Journal. PMID: 42187668
52. Grant GD, Brooks L 3rd, Zhang X (2013) Az U2OS sejtekben időszakosan expresszálódó, sejtciklus által szabályozott gének azonosítása, valamint azok FOXM1 és E2F transzkripciós faktorok általi szabályozása. A sejt molekuláris biológiája. PMID: 24109597
53. Wang F, Wu P, Qin S (2021) A curcin C gátolja az U2OS osteosarcoma sejtvonal proliferációját a JNK jelátviteli út aktiválásán keresztül, ROS által indukált apoptózis, autofágia és sejtciklus-leállás révén. Nemzetközi biológiai makromolekulák folyóirat. PMID: 34896468
54. Chen S, Jin Z, Dai L (2017) Az aloperin apoptózist indukál és gátolja az inváziót az MG-63 és U2OS humán osteosarcoma sejtekben. Biomedicine & pharmacotherapy. PMID: 29080457
55. Chen JM, Zhang J, Xia YM (2018) A természetes édesítőszer-metabolit, a steviol gátolja az emberi osteosarcoma U2OS sejtvonal proliferációját. Oncology Letters. PMID: 29552164
56. Kasiram MZ, Hapidin H, Abdullah H (2022) A tanninsav fokozza a ciszplatin hatását az emberi osteosarcoma sejtvonal (U2OS) sejtproliferációjára és apoptózisára. Pharmacological reports. PMID: 34652600
57. Erdogan MK, Usca AB (2025) A galluszsav fokozza az olaparib által kiváltott sejthalált és csökkenti az olaparib-rezisztenciát az emberi osteosarcoma U2OS sejtvonalban. Current Issues in Molecular Biology. PMID: 39996825
58. Bryan TM, Englezou A, Dalla-Pozza L (1997) Bizonyíték egy alternatív mechanizmusra a telomerhossz fenntartásában emberi daganatokban és daganatból származó sejtvonalakban. Nature Medicine. PMID: 9359704
59. Burke TM, Markwald RR, McHill AW (2015) A koffein hatása az emberi cirkadián órára in vivo és in vitro. Science Translational Medicine. PMID: 26378246
60. Tamai TK, Nakane Y, Ota W (2018) A cirkadián óra modulátorainak azonosítása a már létező gyógyszerek közül. EMBO Molecular Medicine. PMID: 29666146
61. Cellosaurus. U2OS (CVCL_0042). SIB Svájci Bioinformatikai Intézet. Elérhető: https://www.cellosaurus.org/CVCL_0042 (hozzáférés: 2026. augusztus 11.)