Inleiding

De U2OS-cellen Deze celijn — ook bekend als U-2 OS, U-2OS, U-2-OS, U2-OS, U20-S, U20S en 2T — is een van de vroegst opgerichte menselijke kankercellijnen die vandaag de dag nog steeds actief worden gebruikt. De lijn werd halverwege de jaren zestig opgericht uit een matig gedifferentieerd osteosarcoom van het scheenbeen en voor het eerst beschreven door Pontén en Saksela in 1967 [1]. De ontwikkeling ervan bood onderzoekers een hanteerbaar, hechtend model met epitheliale morfologie voor het bestuderen van botneoplasmata, tumorbiologie en fundamentele celbiologie. In de daaropvolgende decennia groeide U2OS uit tot een hoeksteen van het onderzoek naar DNA-herstel, de ontwikkeling van geneesmiddelen tegen osteosarcoom, celcyclusanalyse en genomische profilering. De cellijn behoudt de wildtype TP53-functie — wat relatief zeldzaam is onder osteosarcoomcellijnen — waardoor deze bijzonder waardevol is voor het onderzoeken van p53-afhankelijke signaalwegen, reacties op DNA-schade en de regulering van het circadiane ritme. Met een uitgebreide verzameling omics-datasets en honderden gepubliceerde studies blijft U2OS een van de meest geciteerde en gekarakteriseerde menselijke kankermodellen die beschikbaar zijn voor biomedische wetenschappers.

Belangrijkste punten

• U2OS (Cellosaurus, accessienummer CVCL_0042) is een menselijke osteosarcoomcellijn die halverwege de jaren zestig is geïsoleerd uit scheenbeenweefsel en voor het eerst werd beschreven in 1967.
• Deze celijn bezit het wildtype TP53-gen, waardoor deze een voorkeursmodel is voor onderzoek naar de p53-afhankelijke celcyclus en DNA-schade.
• U2OS-cellen groeien als hechtende monolaagjes met een epitheliale morfologie, met een gerapporteerde verdubbelingstijd van ongeveer 25–30 uur (DSMZ ACC-785) tot 36 uur (Mohseny et al.).
• De lijn is uitgebreid in kaart gebracht aan de hand van datasets op het gebied van genomica, transcriptomica, proteomica en geneesmiddelenscreening, waaronder de Cancer Cell Line Encyclopedia.
• U2OS heeft gediend als platform voor honderden afgeleide, genetisch gemodificeerde cellijnen die worden gebruikt in GPCR-assays, onderzoeken met fluorescerende reporters en op CRISPR gebaseerde functionele screens.
• De huidige onderzoeksonderwerpen omvatten onder meer de ontwikkeling van geneesmiddelen tegen osteosarcoom, mechanismen voor DNA-herstel, circadiane biologie, endocytose en metabolische herprogrammering.

Wat is U2OS?

U2OS is afkomstig van het scheenbeen van een 15-jarige vrouwelijke patiënte met osteosarcoom. De celijn werd halverwege de jaren zestig opgezet en voor het eerst beschreven door Pontén en Saksela in 1967 [1], en werd vervolgens opgenomen in de catalogus van menselijke tumorlijnen voor kankeronderzoek [2]. Uit een vroege immunologische karakterisering bleek dat er geen sprake was van besmetting met HeLa-cellen [3] en stelden het HLA-antigeenprofiel van de cellijn vast [4] [5]. De celijn groeit als een hechtende monolaag met epitheliale morfologie. De gerapporteerde verdubbelingstijden lopen per bron uiteen: ongeveer 25–30 uur volgens de DSMZ-catalogusvermelding (ACC-785) en ongeveer 36 uur in de functionele karakterisering door Mohseny et al. [13] [61]. Deze lijn wordt ingedeeld als een matig gedifferentieerde osteosarcoomlijn die het wildtype TP53 behoudt, waardoor deze zich onderscheidt van andere osteosarcoomlijnen zoals Saos-2, waarin de expressie van p53 volledig ontbreekt. Uit vergelijkende karakterisering bleek dat U2OS-cellen negatief zijn voor de meeste klassieke osteoblastische markers, wat hun relatief ongedifferentieerde toestand weerspiegelt in vergelijking met meer volgroeide osteosarcoomlijnen [6]. De lijn is microsatellietstabiel (MSS) en draagt een heterozygote truncatievariant van PPM1D (p.Arg458Ter, c.1372C>T), die voor U2OS is geregistreerd in Cellosaurus en DepMap (ACH-000364) [61]. Het functionele gevolg van deze klasse van C-terminaal verkorte PPM1D-allelen met functieversterking — een verstoring van het p53-afhankelijke G1-controlepunt — werd door Kleiblova et al. gekarakteriseerd. [7].

Uit chromosomale analyse door middel van vergelijkende genomische hybridisatie bleek dat er in verschillende osteosarcoomcellijnen, waaronder U2OS, complexe genomische afwijkingen voorkwamen, met een gemiddelde van 20,8 afwijkingen per cellijn (bereik 10–31) [8]. Met behulp van array-CGH met hoge resolutie werden bovendien cryptische microaberraties geïdentificeerd, en U-2 OS vertoonde van de vier onderzochte osteosarcoomlijnen het minste aantal van dergelijke gebeurtenissen — zes, de laagste incidentie in het panel — wat overeenkomt met de wildtype TP53-achtergrond van deze lijn, terwijl de TP53-mutante SAOS-2 er 17 vertoonde [9]. Uit de moleculaire karakterisering die binnen het EuroBoNeT-consortium is uitgevoerd, bleek dat U2OS de TP53-wildtype-status bezit en werd een homozygote CDKN2A-deletie geïdentificeerd als de meest voorkomende afwijking binnen het botkankerpanel als geheel (15 van de 36 lijnen), die strikt geassocieerd is met de afwezigheid van het p16-eiwit; voor U2OS zelf is in Cellosaurus geen CDKN2A-deletie geregistreerd [10] [61]. Herschikkingen van het p53-gen zijn vastgesteld bij primaire osteogene sarcomen en verwante cellijnen [11], en er werd aangetoond dat overexpressie van wildtype p53 de celgroei in osteosarcoomcellen remt [12], waarmee de waarde van het U2OS-model voor onderzoek naar de p53-route wordt onderstreept. Functionele studies hebben aangetoond dat U2OS-cellen na subcutane injectie in vivo tumoren vormen, waarmee hun bruikbaarheid als representatief osteosarcoommodel wordt bevestigd [13].

Informatie over celculturen

Voordelen van U2OS-cellen

Een van de belangrijkste voordelen van U2OS is het behoud van het wildtype TP53. Dankzij deze eigenschap is deze celijn bij uitstek geschikt voor het bestuderen van p53-afhankelijke processen, waaronder DNA-schadecontrolepunten, celcyclusstilstand, apoptose en transcriptiereacties op genotoxische stress. Omdat veel osteosarcoom- en kankercellijnen p53-mutaties dragen, vervult U2OS een cruciale rol als bottumormodel waarin de farmacologie van de p53-route kan worden geëvalueerd zonder het verstorende effect van functieverliesmutaties. MDM2-antagonisten illustreren waarom dit onderscheid van belang is. In een panel van sarcoomcellijnen stabiliseerde de MDM2-antagonist Nutlin-3A p53 en induceerde het op efficiënte wijze p53-afhankelijke transcriptie en apoptose stroomafwaarts in lijnen met geamplificeerd MDM2; in cellijnen met wildtype TP53 maar zonder MDM2-amplificatie — de configuratie die in U2OS wordt aangetroffen — werd enige respons op Nutlin waargenomen, maar werd geen apoptose geïnduceerd [14]. Met een p53-competent bottumormodel kan de bijdrage van de p53-status en van de MDM2-dosering dus afzonderlijk worden onderzocht, in plaats van dat deze factoren elkaar beïnvloeden.

U2OS-cellen zijn bij uitstek geschikt voor microscopie van levende cellen en fluorescentie-reporterassays vanwege hun vlakke, hechtende epitheliale morfologie en hun relatief grote celkernen. Deze eigenschappen hebben geleid tot de ontwikkeling van honderden afgeleide, genetisch gemodificeerde cellijnen — waaronder U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP-cellen en talrijke varianten van PathHunter en LanthaScreen, die allemaal zijn opgenomen als onderliggende vermeldingen van CVCL_0042 [61] — die gebruikmaken van de transfectie-eigenschappen en optische helderheid van de ouderlijn. De cellijn maakt ook deel uit van meerdere belangrijke initiatieven op het gebied van genomische en proteomische profilering, waaronder het Cancer Dependency Map-project (DepMap ACH-000364, waarin de Cancer Cell Line Encyclopedia is opgenomen) en het Human Protein Atlas-celatlaspanel, waardoor onderzoekers beschikken over uitgebreide achtergronddatasets waaraan experimentele resultaten kunnen worden getoetst [15] [16] [61].

Deze stam blijkt uitermate geschikt te zijn voor genetische manipulatie en ondersteunt zowel stabiele als tijdelijke transfectie, CRISPR-Cas9-genbewerking, RNAi-knockdown en virale transductie. Dankzij de efficiënte integratie van exogene constructen en de robuuste groeikinetiek is deze stam een praktisch werkpaard voor high-throughput-screeningplatforms. De Cell Painting-profielen voor 5.259 geneesmiddelen in U2OS vormen een van de grootste morfologische referentiedatasets in de chemische biologie en zijn gecombineerd met thermische proteoomprofilering om op grote schaal het werkingsmechanisme van verbindingen af te leiden [17]. Deze brede toepasbaarheid — variërend van de biologie van botkanker en fundamentele celbiologie tot de ontwikkeling van geneesmiddelen — vormt de basis voor de aanhoudende populariteit van U2OS.

Beperkingen van U2OS-cellen

Ondanks zijn vele sterke punten vertoont U2OS chromosomale complexiteit die de interpretatie kan bemoeilijken. Uit vergelijkende genomische hybridisatie bij acht osteosarcoomlijnen bleek dat er gemiddeld 20,8 chromosomale afwijkingen per lijn voorkwamen, waarbij U2OS in meerdere regio’s zowel chromosomale winsten als verliezen vertoonde [8]. De heterozygote, functieverhogende truncatievariant van PPM1D (p.Arg458Ter) verstoort het p53-afhankelijke G1-controlepunt, wat betekent dat p53 weliswaar aanwezig is en op sequentieniveau van het wildtype is, maar dat de daaropvolgende signaaloverdracht gedeeltelijk wordt verzwakt [7] [61]. Onderzoekers die zich bezighouden met de precieze farmacologie van de p53-route, moeten bij de interpretatie van de resultaten rekening houden met deze beïnvloedende factor.

Als een matig gedifferentieerde osteosarcoomcellijn geeft U2OS het fenotype van volgroeide osteoblasten niet getrouw weer. Uit immunocytochemische karakterisering bleek dat deze lijn negatief is voor de meeste osteoblastische markers, in tegenstelling tot de meer volgroeide SaOS-2-cellen regel [6]. Voor onderzoeken waarbij betrouwbare markers voor osteogene differentiatie of mineralisatiereacties nodig zijn, kan U2OS daarom minder representatief zijn voor de biologie van osteoblasten in een laat stadium. Bovendien heeft U2OS, net als alle gevestigde cellijnen, ex vivo aanpassingen ondergaan die mogelijk geen getrouw beeld geven van de biologie van primaire tumoren, met name wat betreft interacties met het stroma en de driedimensionale architectuur [13].

Bij langdurige passage van U2OS bestaat, net als bij elke andere cellijn, het risico op genetische drift en fenotypische variatie tussen subklonen. Authenticatie door middel van STRP-profilering wordt ten zeerste aanbevolen om de reproduceerbaarheid tussen laboratoria te waarborgen. [18]. Onderzoekers dienen er tevens rekening mee te houden dat U2OS slechts een deel van de klassieke extracellulaire matrixeiwitten van osteoblasten tot expressie brengt, waardoor het gebruik ervan als vervangende indicator voor onderzoek naar de botmicro-omgeving – waarbij collageen I of andere producten van volgroeide osteoblasten centraal staan – beperkt is.

Bekijk de volledige specificaties en bestel

Toepassingen

Ontwikkeling van geneesmiddelen tegen osteosarcoom en therapeutische screening

U2OS is een belangrijk model voor het evalueren van nieuwe en herbestemde verbindingen tegen osteosarcoom. In studies is de antitumoractiviteit van diverse natuurlijke en synthetische middelen in deze celijn onderzocht. Van curcine C, een type I ribosoom-inactiverend eiwit uit ontkiemde Jatropha curcas-zaden, bleek de proliferatie van U2OS-cellen te remmen via ROS-gemedieerde apoptose, autofagie en arrestatie in zowel de S- als de G2/M-fase, waarbij het effect werd toegeschreven aan activering van de JNK-signaalroute naast remming van de ERK-route; de ROS-vanger NAC en de JNK-remmer SP600125 verzwakten elk de reactie, wat de voorgestelde cascade ondersteunt [53]. Een vervolgstudie toonde aan dat de hogere werkzaamheid van Curcin C ten opzichte van Curcin in U2OS grotendeels verklaard kan worden door LRP1-gemedieerde clathrine-afhankelijke endocytose, die wel beschikbaar is voor Curcin C maar niet voor Curcin.

Aloperine, een alkaloïde natuurproduct, remde de proliferatie en klonogeniciteit van zowel MG-63- als U2OS-osteosarcoomcellen, induceerde apoptose – zoals bevestigd door flowcytometrie – en remde invasie in scratch- en transwell-assays, met downregulatie van MMP-2, MMP-9, PI3K en p-AKT1 [54]. Deze studie bracht meerdere convergerende routes aan het licht waarlangs natuurlijke alkaloïden tegelijkertijd de groei en het metastatisch potentieel zouden kunnen belemmeren. Los daarvan bleek de natuurlijke zoetstofmetaboliet steviol de proliferatie van U2OS op een dosis- en tijdsafhankelijke manier te remmen; mechanistisch onderzoek bracht een celcyclusstilstand in de G1-fase aan het licht en een mitochondriale apoptotische route, aangegeven door een verhoogde Bax/Bcl-2-verhouding [55] — bevindingen die natuurlijke metabolieten positioneren als kandidaten voor onderzoek naar chemopreventie van osteosarcoom.

Tanninezuur versterkte het cytotoxische effect van cisplatine in U2OS-cellen, maar de interactie bleek sterk verhoudingsafhankelijk: er werd synergie waargenomen bij verhoudingen van looizuur tot cisplatine van 90:10 en 85:15, terwijl verhoudingen van 75:25 en 50:50 antagonistisch werkten, en looizuur alleen de normale hFOB 1.19-osteoblasten niet significant remde [56]. Elke op polyfenolen gebaseerde sensibilisatiestrategie is daarom afhankelijk van een zorgvuldige optimalisatie van de doseringsverhouding in plaats van louter gelijktijdige toediening. Galluszuur versterkte op vergelijkbare wijze de door olaparib geïnduceerde celdood en verzwakte de verworven olaparib-resistentie in U2OS-cellen en een olaparib-resistente afgeleide (U2OS-PIR), waarbij het de angiogenese remde en cPARP, Bcl-2 en Bax [57], waardoor het repertoire aan combinaties van natuurlijke verbindingen die toepasbaar zijn in onderzoek naar de behandeling van osteosarcoom werd uitgebreid. Van lenvatinib, een goedgekeurde multikinaseremmer, werd aangetoond dat het via een p-STAT3/p53/xCT-as ferroptose-gerelateerde veranderingen induceert in U2OS- en 143B-cellen, waarmee een nieuw mechanisme aan het licht kwam waarmee dit middel de progressie van osteosarcoom kan onderdrukken, naast zijn canonieke rol als angiogeneseremmer [19]. Immunotherapie op basis van natuurlijke killercellen (NK-cellen) werd geëvalueerd tegen een panel van osteosarcoomcellijnen, waaronder U2OS, waarbij de expressie van de NKG2D-ligand correleerde met de door NK-cellen gemedieerde afdodings-efficiëntie en waarbij interleukine-2 via aerosol de orgaanspecifieke activiteit van NK-cellen in vivo verbeterde [20].

Een bredere screening op geneesmiddelen tegen sarcomen, omvattende 63 menselijke cellijnen en meer dan 400 oncologische verbindingen, documenteerde de gevoeligheidsprofielen van U2OS voor geneesmiddelen naast gegevens over gen- en microRNA-expressie, wat een rijke farmacogenomische referentie voor het vakgebied opleverde [21]. Het baanbrekende Cancer Cell Line Encyclopedia-project integreerde genexpressie-, kopieaantal- en sequentiegegevens van bijna 950 cellijnen, waaronder U2OS, en bracht deze in verband met geneesmiddelgevoeligheidsprofielen om voorspellende biomarkers voor respons te identificeren [15]. Een daaropvolgend farmacogenomisch overzichtsonderzoek bracht verbanden tussen geneesmiddelgevoeligheid en door kanker veroorzaakte veranderingen in kaart bij meer dan 1.000 geannoteerde cellijnen, waardoor de reacties van U2OS verder in de bredere context van de oncologie werden geplaatst [22].

De miR-16-1-3p/MDM2/p53-as is naar voren gekomen als een belangrijke regulator van de TGF-β1-signaaloutput bij osteosarcoom. Xue et al. toonden aan dat overexpressie van miR-16-1-3p het proliferatieve en klonogene potentieel van U2OS-cellen aanzienlijk verminderde, terwijl de combinatie ervan met een TGF-β-behandeling de G1-fase-arrestatie sterk versterkte en het vermogen tot tumorgroei vrijwel tenietdeed [23]. Uit hetzelfde onderzoek bleek dat miR-16-1-3p de door TGF-β geïnduceerde actinehermodellering en de veranderingen die gepaard gaan met de epitheliaal-mesenchymale overgang remde, en dat gelijktijdige toediening de gevoeligheid voor cisplatine in wildtype U2OS-cellen verhoogde en het volume van de tumorknobbels en de uitzaaiingen in het kippen-chorioallantoïsmembraanmodel verminderde, wat mechanistisch inzicht verschaft in hoe dit microRNA de pro-metastatische tak van de TGF-β-signaalroute onderdrukt. Van uit osteoblasten afkomstige extracellulaire vesikels (OB-EV’s) werd aangetoond dat ze het gedrag van osteosarcoomcellen op een lijn-afhankelijke manier veranderen: in U2OS verminderden ze de metabolische activiteit (1,30-voudig) en de proliferatie (1,70-voudig) terwijl ze de apoptose verhoogden (1,15-voudig), terwijl de proliferatie van MG-63 4,9-voudig toenam. De bijbehorende transcriptomische profilering werd uitgevoerd in MNNG/HOS-cellen, waar 296 genen differentieel tot expressie kwamen, en de auteurs stellen miRNA-shuttling voor als een mogelijk bijdragend mechanisme dat nog functionele validatie vereist [24]. Metabole herprogrammering bij osteosarcoom werd onderzocht via single-cell-transcriptomica, waarbij stanniocalcine-2 (STC2) werd geïdentificeerd als een centrale glycolytische regulator die functioneel werd gevalideerd in MG-63- en U2OS-cellen met behulp van Seahorse-extracellulaire fluxanalyse [25].

DNA-herstel, regulering van de celcyclus en reactie op DNA-schade

U2OS is een van de meest gebruikte modellen in onderzoek naar DNA-herstel, grotendeels omdat de wildtype p53-achtergrond het mogelijk maakt het volledige spectrum van p53-afhankelijke schadereacties te onderzoeken. Een studie op genoomschaal bracht het door de celcyclus gereguleerde transcriptoom van U2OS in kaart, waarbij 2.140 periodiek tot expressie gebrachte transcripten werden geïdentificeerd die overeenkomen met 1.871 unieke genen verspreid over meerdere synchrone celcycli [52]. Door ChIP-seq voor de G2/M-transcriptiefactor FOXM1 te combineren met gepubliceerde ChIP-seq-gegevens voor E2F1, E2F4, E2F6, GABPA en het DREAM-complex, toonden de auteurs aan dat FOXM1 de promotors van G2/M-fase-genen sterk activeert en die welke in de S-fase worden geïnduceerd slechts zwak activeert, en dat een kernset van celcyclusgenen die U2OS en HeLa gemeen hebben, wordt gebonden door meerdere celcyclus-transcriptiefactoren. De dataset vestigde U2OS als een tweede, onafhankelijk gekarakteriseerd menselijk model voor het in kaart brengen van het celcyclus-transcriptoom en blijft een veelgebruikte referentie voor studies naar genregulatie van de menselijke celdelingscyclus.

Gain-of-function-mutaties in PPM1D/Wip1 — het fosfatase dat p53 inactiveren — leiden tot een aan het C-uiteinde verkorte, hyperactieve Wip1 en verstoren het p53-afhankelijke G1-controlepunt na DNA-schade; U2OS draagt een dergelijk verkortend allel (p.Arg458Ter) heterozygoot [7] [61]. Dit maakt U2OS tot een bruikbaar model om te bestuderen hoe Wip1-verkortingen een selectief groeivoordeel opleveren door de reactie op DNA-schade te verzwakken. De variabiliteit per cel in de reactie op DNA-schade werd gekwantificeerd in U2OS-cellen die werden blootgesteld aan 2 Gy fotonen; door 53BP1- en γH2AX-foci in zusterkernen van binucleaire cellen te vergelijken, toonden Płódowska et al. stochastische cel-tot-celruis aan bij de vorming van herstelfoci, die bovenop willekeurig verdeelde DNA-schade lag, waarbij de ruis 28% van de totale variabiliteit voor 53BP1-foci en 50% voor γH2AX-foci uitmaakte [26]. Analyse van de uitwisseling van zusterchromatiden in wekedelensarcoomlijnen, waaronder U2OS-vergelijkingscellen, bevestigde dat de endogene vorming van γH2AX correleert met genomische instabiliteit en mogelijk de respons op DNA-beschadigende behandelingen kan voorspellen [27].

U2OS-cellen werden gebruikt om somatische CAG-herhalingsuitbreiding bij de ziekte van Huntington te onderzoeken. Genetische verstoring van de MSH3 Y245/K246 IDL-bindingsplaats verminderde de DNA-interactie aanzienlijk en maakte een einde aan de herhalingsuitbreiding in een U2OS-lijn die mutant HTT-exon 1 tot expressie bracht, en farmacologische blokkade van dezelfde plaats verminderde de herhalingsuitbreiding in U2OS en, belangrijker nog, vertraagde ook de uitbreiding in medium spiny neuronen afkomstig van iPSC’s van HD-patiënten [28]. De afgeleide U2OS DR-GFP-lijn wordt op grote schaal gebruikt voor homologe recombinatiehersteltests, en er zijn meerdere knock-out-afgeleiden — waaronder RAD52-, TBK1- en OPTN-knock-outs — gegenereerd om specifieke componenten van het herstelpad te ontrafelen; deze zijn allemaal gecatalogiseerd als onderliggende vermeldingen van CVCL_0042 [61]. De TSC2-tumorsuppressor werd geïdentificeerd als een onderdrukker van stressgranules; in een preprint waarin dit werk werd gerapporteerd, leidde een door siRNA gemedieerde gedeeltelijke vermindering van TSC2 in U2OS-cellen niet tot spontane stressgranules, in tegenstelling tot het volledige verlies dat werd waargenomen in embryonale fibroblasten van muizen, waarmee TSC2 werd aangewezen als een drempelafhankelijke regulator van de assemblage van stressgranules [29]. Bij genoombrede screenings naar homozygote deleties en verstoringen van genen van het polariteitscomplex in panelen van kankercellijnen is ook gebruikgemaakt van U2OS-gegevens, wat heeft bijgedragen aan de identificatie van recessieve kankergenen en kenmerken van fragiele locaties [30] [31].

Circadiane biologie en genregulatie

U2OS is uitgegroeid tot een toonaangevend model voor onderzoek naar de circadiane klok bij zoogdieren. De cellen vertonen robuuste, zelfvoorzienende circadiane ritmes en worden routinematig gebruikt in combinatie met luciferase-reporters voor klokgenen voor realtime luminometrie. Burke et al. gebruikten U2OS-cellen die luciferase-reportergenen van klokgenen tot expressie brengen om aan te tonen dat cafeïne de circadiane periode op een dosisafhankelijke manier verlengt, en stelden door middel van farmacologische analyse en siRNA-knockdown vast dat de signalering via de adenosinereceptor — in plaats van de activiteit van de ryanodinereceptor of fosfodiësterase — verantwoordelijk is voor het effect [59]. Hetzelfde systeem ondersteunt chemische screening op grote schaal: bij een high-throughput-screening van bestaande geneesmiddelen in U2OS-cellen bleek dat ongeveer 5% de circadiane periode veranderde, waarbij dehydroepiandrosteron werd geïdentificeerd als een periodeverkortende verbinding en ABL1, ABL2 en het BCR-kinase in verband werden gebracht met de regulatie van de periode [60]. Deze eigenschappen zijn op grote schaal benut om de moleculaire mechanismen te karakteriseren die de centrale BMAL1/CLOCK-transcriptie-translatie-feedbacklus en de interacties daarvan met oncogene routes regelen.

In een recente preprint werd de endogene circadiane aard van c-MYC in U2OS-cellen onderzocht. Door een c-MYC-reporter te genereren en de oscillatiefase daarvan te vergelijken met die van BMAL1- en PER2-reporters, rapporteerden Kalyanaraman et al. dat de c-MYC-promotor ritmisch oscilleert in U2OS — een celijn met inherent lage MYC-niveaus — en dat deze oscillatie niet in fase is met de kerncomponenten van de klok [32]. Een op deze bevindingen gebaseerd computationeel model suggereerde dat MYC fungeert als een klokverstorer waarvan de timing de negatieve impact op de circadiane tijdmeting minimaliseert — een bevinding met implicaties voor het begrip van hoe oncogene MYC-overexpressie de circadiane fysiologie verstoort. Aangezien het hier om een preprint gaat, heeft dit werk de peer review nog niet doorlopen. Het illustreert niettemin de geschiktheid van U2OS voor het gelijktijdig onderzoeken van oncogenfunctie en circadiane regulatie.

U2OS is telomerase-negatief en onderhoudt zijn telomeren via alternatieve telomeerverlenging (ALT), het op recombinatie gebaseerde mechanisme dat voor het eerst werd gedocumenteerd in een subgroep van tumoren en van tumoren afgeleide cellijnen door Bryan et al. [58]. Dit maakt het tot een standaardmodel voor ALT-onderzoek, een mechanisme dat actief is in een subgroep van kankers, waaronder osteosarcomen. De lijn wordt ook vaak gebruikt in studies naar de dynamiek van histonmodificaties, de nucleaire architectuur en de chromatine-organisatie, waarbij gebruik wordt gemaakt van de grote kernen en de optische hanteerbaarheid ervan. Met fluorescerende markeringen voorziene histon- en kernporiënderivaten — waaronder U2OS EGFP-H2B en meerdere met CRISPR gemarkeerde NUP96-lijnen afgeleid van U2OS — hebben kwantitatieve beeldvorming van chromatine- en kerntransportprocessen met hoge ruimtelijke resolutie mogelijk gemaakt [61].

Endocytose en intracellulair transport

U2OS is uitgegroeid tot een standaardmodel voor het bestuderen van clathrine-gemedieerde endocytose (CME) en dynamine-GTPase-activiteit, dankzij de robuuste receptor-internaliseringsactiviteit en de geschiktheid voor kwantitatieve, op fluorescentie gebaseerde CME-assays waarbij de opname van transferrine-Alexa594 wordt gemeten. Een reeks sulfonadyn-verbindingen — arylsulfonamiden afgeleid van dansylcadaverine-analogen — werd gekarakteriseerd als GTP-competitieve dynamine I- en dynamine II-remmers, waarbij U2OS-cellen als primair CME-testplatform werden gebruikt [33]. Een Michaelis-Menten-kinetische analyse in dit systeem bevestigde het remmingsmechanisme, en de krachtigste analoog vertoonde ook anti-epileptische activiteit in diermodellen, waardoor op U2OS gebaseerde CME-testen zich profileren als een translationeel hulpmiddel voor de ontdekking van neurologische geneesmiddelen.

Los daarvan werden het uit zee afkomstige hydroxyquinon-sesquiterpeen bolinaquinon en verwante naftochinon-analogen geëvalueerd op CME-remmende activiteit in U2OS-cellen, waarbij structuuroptimalisatie op basis van de dichtheidsfunctionaaltheorie leidde tot analogen met aanzienlijk verbeterde potentie tegen zowel dynamine-GTPase als CME [34]. Deze studies illustreren hoe op U2OS gebaseerde CME-assays dienen als een gevoelig en reproduceerbaar platform voor onderzoek naar de structuur-activiteitsrelatie van endocytose-remmers. De consistente receptorexpressie en voorspelbare internaliseringskinetiek van deze cellijn maken het tot een voorkeurscelsysteem voor dit soort onderzoek.

Het lot van antisense-oligonucleotiden (ASO’s) na opname door de cel werd in U2OS-cellen gevolgd met behulp van levende-celmicroscopie, ratiometrische pH-metingen en driedimensionale gefocusseerde ionenbundel-scanningelektronenmicroscopie. In een preprint waarin dit werk werd beschreven, toonden Sitarska et al. aan dat zelfs onder omstandigheden waarbij het doel-RNA met meer dan 90% werd gereduceerd, minder dan 4% van de geïnternaliseerde ASO’s de kern bereikte, en dat ASO’s zich ophoopten in late endosomen, endolysosomen en lysosomen, waar ze luminaire neutralisatie induceerden zonder rekrutering van galectine-3 of scheuring van het beperkende membraan [35]. De auteurs stellen dat productieve ontsnapping in plaats daarvan eerder in de endocytose plaatsvindt, hoogstwaarschijnlijk in vroege of recycling-endosomen. U2OS-cellen werden ook gebruikt in een GLP-1R-activeringsassay — een U2OS-lijn die cAMP-gevoelige Nomad-biosensoren tot expressie brengt — om de metabolische effecten van een in fosfolipiden geformuleerd bergamotte-extract te evalueren, waarmee het nut van de lijn als een gemanipuleerd platform voor receptorexpressie voor de farmacologie van natuurlijke producten werd aangetoond [36]. De cybrid-technologie voor het bestuderen van mitochondriale DNA-mutaties werd verder ontwikkeld door de validatie van nieuw ontwikkelde mtDNA-vrije (ρ0) derivaten van HCT116, HT1080 en U2OS als ontvangercellijnen voor de generatie van transmitochondriale cybriden [37].

Proteomica, genomica en multi-omics-platforms

U2OS is een belangrijke referentiecellijn geweest in grootschalige proteomica-initiatieven. Het eerste specifieke proteoomprofiel van U2OS werd gegenereerd door Niforou et al. met behulp van tweedimensionale gelelektroforese gekoppeld aan MALDI-massaspectrometrie: ongeveer 3.000 spots werden uit twee 2-DE-gels gesneden en geanalyseerd, wat leidde tot de identificatie van 237 verschillende genproducten, waaronder 11 proto-oncogenen die verband houden met de kankercelstatus van de lijn [16]. In daaropvolgend onderzoek op basis van massaspectrometrie werd het absolute proteoom van deze lijn in de interfase en mitose gekwantificeerd — in de publicatie beschreven als een veelgebruikte menselijke cellijn en in Cellosaurus toegewezen aan U2OS —, waaruit bleek dat er ten minste ongeveer 10.000 eiwitten tot expressie komen, met een cellulaire abundantie die zeven ordes van grootte beslaat, tot 20 miljoen kopieën per cel [38] [61]. Vergelijkende proteomica van elf veelvoorkomende cellijnen toonde aan dat U2OS een kern van alom tot expressie gebrachte eiwitten deelt, terwijl er cel-type-specifieke variatie in functionele subsets zichtbaar is [39].

Grootschalige celoppervlakteproteomica met behulp van Cell Surface Capture-technologie bracht het oppervlakte-oom van U2OS in kaart, samen met 40 andere menselijke celtypen (in totaal 41 menselijke en 31 muizenceltypen), wat een bron vormt voor het identificeren van farmacologisch toegankelijke doelwitten op het celoppervlak [40]. In studies naar HLA-typering en de voorspelling van neo-epitopen werd U2OS meegenomen ter ondersteuning van de ontwikkeling van doelwitten voor immuuntherapie tegen kanker [41] [42]. De karakterisering via een reverse-phase-eiwitarray van meer dan 650 kankercellijnen omvatte ook U2OS, waarmee werd aangetoond dat fosfoproteomische gegevens een voorspellende waarde hebben voor geneesmiddelgevoeligheid die verder reikt dan die welke uitsluitend uit mRNA-metingen kan worden afgeleid [43]. De pan-kankerproteomische kaart, die 949 cellijnen omvat, integreerde de proteomische gegevens van U2OS verder met CRISPR-essentiëntiescreens en gegevens over de reactie op geneesmiddelen, waardoor duizenden eiwitbiomarkers van kwetsbaarheid voor kanker aan het licht kwamen [44].

Transcriptoomwijde karakterisering van 675 kankercellijnen door middel van RNA-sequencing bracht genfusies, mutatiesignaturen en de expressie van niet-menselijke sequenties in U2OS in kaart [45]. De CCLE-karakterisering van de volgende generatie breidde de profilering uit met gegevens over DNA-methylatie, histonmodificatie, microRNA-expressie en RNA-splicing in 1.072 lijnen, waarbij U2OS bijdroeg aan integratieve analyses van moleculaire kenmerken die ten grondslag liggen aan reacties op geneesmiddelen [46]. Kwantitatieve proteomica van het CCLE-panel identificeerde ontregeling van signaalroutes op eiwitniveau die niet duidelijk naar voren kwam uit genomische of transcriptomische gegevens alleen [47]. Cell Painting in combinatie met Thermal Proteome Profiling in U2OS-cellen bleek een krachtige strategie te zijn voor het afleiden van het werkingsmechanisme van geneesmiddelen door morfologische profilering te integreren met onbevooroordeelde detectie van eiwitdoelwitten [17]. Proteomische datasets van U2OS worden ook onderworpen aan kwaliteitscontrole op viroomniveau: er werd een xenoproteomische workflow ontwikkeld voor de niet-gerichte detectie van virale eiwitten in proteomische gegevens als algemene screeningsstap, waarbij de auteurs aanbevelen dat elke cellulaire proteoomdataset vóór publicatie wordt getest op niet-menselijke eiwitten [48]. Een integratieve epigenomische analyse van osteosarcoom, waarbij gebruik werd gemaakt van U2OS-cellen, identificeerde 350 genen met samenvallende genetische en epigenetische afwijkingen, wat het inzicht in het regulerende landschap dat de progressie van bottumoren bepaalt, heeft vergroot [49]. De eiwitexpressie in celmicroarrays werd ook geëvalueerd met behulp van U2OS-cellen ingebed in agarosematrices, waardoor gelijktijdige profilering van meerdere cellijnen in een weefselmicroarray-formaat mogelijk werd [50]. Vroege merkerreacties van U2OS-cellen op extracten van een met hyaluronzuur gecoat xenogeen bottransplantaat werden gekarakteriseerd met qRT-PCR: RUNX2 was 2,61-voudig opgereguleerd (p = 0,01), terwijl er geen significant effect werd gerapporteerd voor COL1A1, en de waargenomen verschillen in metabolische activiteit bleven na FDR-correctie niet significant [51]. De auteurs omschrijven het onderzoek als verkennend en pleiten voor validatie in primaire cellen en in vivo-modellen.

Conclusie

U2OS (CVCL_0042) is een opmerkelijk veelzijdige menselijke osteosarcoomcellijn die heeft bijgedragen aan fundamentele vooruitgang op het gebied van onderzoek naar botneoplasmata, DNA-reparatiebiologie, circadiane ritmewetenschap, endocytosefarmacologie en grootschalige omics-profilering. De wildtype TP53-achtergrond, de hechtende epitheliale morfologie, de snelle verdubbelingstijd en de diepgaande multi-omics-karakterisering maken het tot een uitzonderlijk goed onderbouwd experimenteel model. Van vroege HLA-typeringsstudies tot hedendaagse, op CRISPR gebaseerde functionele screens en ‘Cell Painting’-geneesmiddelenprofilering: U2OS heeft zich voortdurend aangepast aan de behoeften van de biomedische onderzoeksgemeenschap. Onderzoekers die op zoek zijn naar een betrouwbaar, uitgebreid gedocumenteerd model voor de biologie van osteosarcoom, celcyclusregulatie, DNA-schadereactie of high-throughput screening van verbindingen, zullen U2OS een onmisbaar hulpmiddel vinden. Bekijk de volledige specificaties of bestel U2OS-cellen direct op cytion.com.

Belangrijke publicaties

1. Pontén J, Saksela E (1967) Twee gevestigde in-vitro-cellijnen afkomstig van menselijke mesenchymale tumoren. International Journal of Cancer. PMID: 6081590
2. Fogh J (1986) Menselijke tumorlijnen voor kankeronderzoek. Cancer Investigation. PMID: 3518877
3. Fogh J, Wright WC, Loveless JD (1977) Afwezigheid van HeLa-celverontreiniging in 169 cellijnen afkomstig van menselijke tumoren. Journal of the National Cancer Institute. PMID: 833871
4. Espmark JA, Ahlqvist-Roth L, Särne L (1978) Weefseltyping van cellen in kweek. III. HLA-antigenen van gevestigde menselijke cellijnen. Tissue Antigens. PMID: 77569
5. Pollack MS, Heagney SD, Livingston PO (1981) Expressie van HLA-A-, B-, C- en DR-alloantigenen op 46 gekweekte menselijke tumorcellijnen. Journal of the National Cancer Institute. PMID: 7017212
6. Pautke C, Schieker M, Tischer T (2004) Karakterisering van de osteosarcoomcellijnen MG-63, Saos-2 en U-2 OS in vergelijking met menselijke osteoblasten. Anticancer Research. PMID: 15736406
7. Kleiblova P, Shaltiel IA, Benada J (2013) Gain-of-function-mutaties van PPM1D/Wip1 verstoren het p53-afhankelijke G1-controlepunt. The Journal of Cell Biology. PMID: 23649806
8. Ozaki T, Neumann T, Wai D (2003) Chromosomale veranderingen in osteosarcoomcellijnen, aangetoond door vergelijkende genomische hybridisatie en meerkleurige karyotypering. Cancer Genetics and Cytogenetics. PMID: 12645653
9. Selvarajah S, Yoshimoto M, Maire G (2007) Identificatie van cryptische microaberraties in osteosarcoom door middel van vergelijkende genomische hybridisatie met een high-definition oligonucleotide-array. *Cancer Genetics and Cytogenetics*. PMID: 17981215
10. Ottaviano L, Schaefer KL, Gajewski M (2010) Moleculaire karakterisering van veelgebruikte cellijnen voor onderzoek naar bottumoren: een trans-Europees EuroBoNet-initiatief. Genes, chromosomes & cancer. PMID: 19787792
11. Masuda H, Miller C, Koeffler HP (1987) Herschikking van het p53-gen bij menselijke osteogene sarcomen. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2823272
12. Diller L, Kassel J, Nelson CE (1990) p53 functioneert als een celcyclusregulerend eiwit bij osteosarcomen. Molecular and cellular biology. PMID: 2233717
13. Mohseny AB, Machado I, Cai Y (2011) Functionele karakterisering van osteosarcoomcellijnen levert representatieve modellen op voor onderzoek naar de ziekte bij de mens. Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. PMID: 21519327
14. Müller CR, Paulsen EB, Noordhuis P (2007) Mogelijkheden voor de behandeling van liposarcomen met de MDM2-antagonist Nutlin-3A. International Journal of Cancer. PMID: 17354236
15. Barretina J, Caponigro G, Stransky N (2012) De Cancer Cell Line Encyclopedia maakt voorspellende modellering van de gevoeligheid voor antikankergeneesmiddelen mogelijk. Nature. PMID: 22460905
16. Niforou KM, Anagnostopoulos AK, Vougas K (2008) Het proteoomprofiel van de menselijke osteosarcoom-cellijn U2OS. Cancer Genomics & Proteomics. PMID: 18359981
17. Johansson C, Johansson M, Kasi PB (2026) Cell painting en thermische proteoomprofilering voor het afleiden van medicijndoelwitten en werkingsmechanismen. Molecular systems biology. PMID: 42141265
18. Yu M, Selvaraj SK, Liang-Chu MM (2015) Een hulpmiddel voor authenticatie, annotatie en kwaliteitscontrole van cellijnen. Nature. PMID: 25877200
19. Yang C, Ma Y, Shen W (2026) Lenvatinib induceert ferroptose-gerelateerde veranderingen in osteosarcoomcellen waarbij de p-STAT3/p53/xCT-as betrokken is. Frontiers in oncology. PMID: 42294277
20. Guma SR, Lee DA, Yu L (2014) Natural killer-celtherapie en aerosol-interleukine-2 voor de behandeling van longmetastasen bij osteosarcoom. Pediatric Blood & Cancer. PMID: 24136885
21. Teicher BA, Polley E, Kunkel M (2015) Screening van oncologische geneesmiddelen en experimentele middelen op sarcoomcellijnen identificeert patronen die verband houden met gen- en microRNA-expressie. Molecular Cancer Therapeutics. PMID: 26351324
22. Iorio F, Knijnenburg TA, Vis DJ (2016) Een overzicht van farmacogenomische interacties bij kanker. Cell. PMID: 27397505
23. Xue W, Wang Y, Smirnova AV (2026) miR-16-1-3p remt proliferatie en invasiviteit via de MDM2-p53-as in de TGF-β1-signaalroute bij osteosarcoom. Molecular Therapy. Oncology. PMID: 42318056
24. Giacchi L, Ucci A, Zelli V (2026) Effect van uit osteoblasten afkomstige extracellulaire vesikels op het transcriptieprofiel van osteosarcoomcellen: de rol van getransporteerde miRNA's. Biomedicines. PMID: 42193365
25. Hu X, Wang Q, Lin S (2026) Transcriptomica op het niveau van individuele cellen onthult glycolytische heterogeniteit en identificeert STC2 als een belangrijke regulator van metabolische herprogrammering bij osteosarcoom. Moleculaire en cellulaire biochemie. PMID: 42166004
26. Płódowska M, Drzazga D, Węgierek-Ciuk A (2026) Beoordeling van de variatie in de reactie op DNA-schade van individuele menselijke cellen die zijn blootgesteld aan fotonenstraling. Straling en milieubiophysica. PMID: 42301301
27. Salawu A, Wright K, Al-Kathiri A (2018) Zusterchromatide-uitwisseling en genomische instabiliteit bij wekedelensarcomen: mogelijke implicaties voor de respons op DNA-beschadigende behandelingen. Sarcoma. PMID: 29853780
28. Goold R, Donaldson J, Gidney F (2026) Genetische of farmacologische verstoring van de MSH3 Y245/K246 IDL-bindingsholte vertraagt de expansie van CAG-herhalingen. NAR Molecular Medicine. PMID: 42317610
29. Ma Y, Farny NG (2026) TSC2 is een remmer van stressgranules. bioRxiv. Preprint — niet peer-reviewed. PMID: 42239325
30. Bignell GR, Greenman CD, Davies H (2010) Kenmerken van mutatie en selectie in het kankergenoom. *Nature*. PMID: 20164919
31. Rothenberg SM, Mohapatra G, Rivera MN (2010) Een genoombrede screening op microdeleties onthult verstoring van genen van het polariteitscomplex in diverse vormen van kanker bij de mens. Cancer Research. PMID: 20215515
32. Kalyanaraman B, Ganesh D, Kunte VA (2026) c-MYC wordt op circadiane wijze getranscribeerd en fungeert als een klokverstorer waarvan de timing de effecten ervan minimaliseert. bioRxiv. Preprint — niet peer-reviewed. PMID: 42244582
33. Jones NC, Robertson MJ, Odell LR (2026) Sulfonadyn-verbindingen: een klasse van arylsulfonamiden die dynamine-GTPase en door clathrine gemedieerde endocytose remmen en in diermodellen antiepileptisch werken. ACS Chemical Biology. PMID: 42313002
34. O'Brien NS, Ghods A, Xue J (2025) Van bolinaquinon, een marien hydroxyquinon-sesquiterpeen, tot naftochinonen met clathrineremmende effecten. RSC Medicinal Chemistry. PMID: 41884311
35. Sitarska E, Saminathan A, Scanavachi G (2026) Naakte antisense-oligonucleotiden blijven endolysosomaal opgesloten ondanks geïnduceerde membraanschade. bioRxiv. Preprint — niet peer-reviewed. PMID: 42182263
36. Khan A, Mella RM, Villacé P (2026) In-vitro-evaluatie van de GLP-1R-gerelateerde activiteit van een duurzaam, gestandaardiseerd bergamotextract in fosfolipideformulering. Biomedicines. PMID: 42193436
37. Weaver L, Alexeyev MF (2026) Een verbeterde methode voor het genereren van transmitochondriale cybriden. Cells. PMID: 42193905
38. Beck M, Schmidt A, Malmstroem J (2011) Het kwantitatieve proteoom van een menselijke cellijn. Molecular systems biology. PMID: 22068332
39. Geiger T, Wehner A, Schaab C (2012) Vergelijkende proteomische analyse van elf gangbare cellijnen onthult alomtegenwoordige maar variërende expressie van de meeste eiwitten. Molecular & cellular proteomics. PMID: 22278370
40. Bausch-Fluck D, Hofmann A, Bock T (2015) Een op massaspectrometrie gebaseerde atlas van celoppervlakte-eiwitten. PloS one. PMID: 25894527
41. Boegel S, Löwer M, Bukur T (2014) Een catalogus van HLA-typen, HLA-expressie en kandidaat-neo-epitopen in menselijke kankercellijnen. Oncoimmunology. PMID: 25960936
42. Scholtalbers J, Boegel S, Bukur T (2015) TCLP: een online catalogus van kankercellijnen waarin HLA-type, voorspelde neo-epitopen, virus- en genexpressie zijn geïntegreerd. Genome Medicine. PMID: 26589293
43. Li J, Zhao W, Akbani R (2017) Karakterisering van menselijke kankercellijnen met behulp van reverse-phase-eiwitarrays. Cancer Cell. PMID: 28196595
44. Gonçalves E, Poulos RC, Cai Z (2022) Pan-kankerproteomische kaart van 949 menselijke cellijnen. Cancer Cell. PMID: 35839778
45. Klijn C, Durinck S, Stawiski EW (2015) Een uitgebreid transcriptieprofiel van menselijke kankercellijnen. Nature Biotechnology. PMID: 25485619
46. Ghandi M, Huang FW, Jané-Valbuena J (2019) Karakterisering van de volgende generatie van de Cancer Cell Line Encyclopedia. Nature. PMID: 31068700
47. Nusinow DP, Szpyt J, Ghandi M (2020) Kwantitatieve proteomica van de Cancer Cell Line Encyclopedia. Cell. PMID: 31978347
48. Chernobrovkin AL, Zubarev RA (2014) Detectie van virale eiwitten in menselijke cellijnen door middel van xeno-proteomica: het wegnemen van het laatste geldige excuus om niet elke cellulaire proteoomdataset op virale eiwitten te testen. PloS one. PMID: 24618588
49. Kresse SH, Rydbeck H, Skårn M (2012) Integratieve analyse onthult verbanden tussen genetische en epigenetische veranderingen bij osteosarcoom. PloS one. PMID: 23144859
50. Andersson AC, Strömberg S, Bäckvall H (2006) Analyse van eiwitexpressie in celmicroarrays: een hulpmiddel voor op antilichamen gebaseerde proteomica. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. PMID: 16957166
51. Mayer Y, Abu Sada H, Zigdon Giladi H (2026) Vroege reacties van osteogene en stromale markers van osteoblastachtige en beenmergstromale cellijnen op een met hyaluronzuur gecoat xenogeen bottransplantaat: een verkennende in-vitroanalyse. Dentistry Journal. PMID: 42187668
52. Grant GD, Brooks L 3rd, Zhang X (2013) Identificatie van door de celcyclus gereguleerde genen die periodiek tot expressie komen in U2OS-cellen en de regulatie daarvan door de transcriptiefactoren FOXM1 en E2F. Molecular Biology of the Cell. PMID: 24109597
53. Wang F, Wu P, Qin S (2021) Curcine C remt de proliferatie van de osteosarcoomcellijn U2OS door ROS-geïnduceerde apoptose, autofagie en celcyclusstilstand via activering van de JNK-signaalroute. International Journal of Biological Macromolecules. PMID: 34896468
54. Chen S, Jin Z, Dai L (2017) Aloperine induceert apoptose en remt de invasie in menselijke osteosarcoomcellen van de lijnen MG-63 en U2OS. Biomedicine & pharmacotherapy. PMID: 29080457
55. Chen JM, Zhang J, Xia YM (2018) De metaboliet steviol, een natuurlijke zoetstof, remt de proliferatie van de menselijke osteosarcoomcellijn U2OS. Oncology Letters. PMID: 29552164
56. Kasiram MZ, Hapidin H, Abdullah H (2022) Tanninezuur versterkt het effect van cisplatine op de celproliferatie en apoptose van de menselijke osteosarcoomcellijn (U2OS). Pharmacological reports. PMID: 34652600
57. Erdogan MK, Usca AB (2025) Galluszuur versterkt door olaparib geïnduceerde celdood en vermindert de resistentie tegen olaparib in de menselijke osteosarcoom-U2OS-cellijn. Current Issues in Molecular Biology. PMID: 39996825
58. Bryan TM, Englezou A, Dalla-Pozza L (1997) Bewijs voor een alternatief mechanisme voor het behoud van de telomeerlengte in menselijke tumoren en van tumoren afgeleide cellijnen. Nature Medicine. PMID: 9359704
59. Burke TM, Markwald RR, McHill AW (2015) Effecten van cafeïne op de menselijke circadiane klok in vivo en in vitro. Science Translational Medicine. PMID: 26378246
60. Tamai TK, Nakane Y, Ota W (2018) Identificatie van modulatoren van de circadiane klok uit bestaande geneesmiddelen. EMBO Molecular Medicine. PMID: 29666146
61. Cellosaurus. U2OS (CVCL_0042). SIB Swiss Institute of Bioinformatics. Beschikbaar op: https://www.cellosaurus.org/CVCL_0042 (geraadpleegd op 11 augustus 2026)