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Células CX-1
Tecido
Cólon
Doença
Adenocarcinoma
Sinónimos
HT-29/Cx-1, Cx1

Documentos

Células CX-1

Cell line · Número do produto 300159

A linha celular CX-1 é derivada de um adenocarcinoma do cólon humano, caracterizada pelo seu potencial metastático, nomeadamente para o fígado, quando inoculada em...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular CX-1 é derivada de um adenocarcinoma do cólon humano, caracterizado pelo seu potencial metastático, particularmente para o fígado, quando inoculado em modelos animais adequados, como os ratinhos nus atímicos. As células CX-1 foram geradas através da introdução de células HT-29 em ratinhos atímicos. Estas células servem como um sistema modelo fiável para estudar os meandros do adenocarcinoma do cólon.

A linha celular CX-1 expressa níveis elevados dos antigénios de hidratos de carbono sialosil Lewis a (sialosil Le^a) e antigénio carcinoembrionário (CEA), que estão associados à progressão do tumor, metástases e adesão ao endotélio vascular em vários cancros, incluindo o carcinoma colorrectal.

A linha celular de carcinoma do cólon humano CX-1 constitui um recurso fundamental para compreender os mecanismos moleculares da metástase do cancro colorrectal.

Tecido
Cólon
Doença
Adenocarcinoma
Sinónimos
  • HT-29/Cx-1
  • Cx1

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sim, em ratinhos nus
Tempo de duplicação
24 horas

04Identificadores

Referência
CX-1 (número de catálogo Cytion 300159)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2011

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
P53 positivo, CEA positivo
Transcriptase reversa
Negativo
Produtos
Citoqueratina 8, 18, 19

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm² produzirá uma camada confluente em cerca de 4 a 6 dias.
Renovação de fluidos
1 a 2 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
44 anos
Etnia
Caucasiano