HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

La línea celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 es un derivado genéticamente modificado de las células HeLa Kyoto, conocidas por su robustez y su uso generalizado en la investigación científica. Esta línea celular ha sido modificada mediante la tecnología CRISPR-Cas9 para expresar Nup358 marcado con mEGFP (proteína fluorescente verde mejorada monomérica), un componente crucial del complejo de poros nucleares (NPC). La Nup358, también conocida como RanBP2, desempeña un papel significativo en el transporte nucleocitoplasmático, el ensamblaje del huso mitótico y otros procesos celulares. La etiqueta mEGFP permite visualizar la Nup358, lo que facilita la observación en tiempo real de su dinámica e interacciones dentro de la célula.

Las células HeLa Kyoto, una sublínea de las células HeLa originales, se caracterizan por su adaptabilidad y su crecimiento estable en cultivo. El sistema CRISPR-Cas9 en esta línea celular permite una edición genómica precisa, lo que garantiza que la etiqueta mEGFP se fusione con exactitud a la proteína Nup358 sin alterar su función. Esto convierte a la línea celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 en una herramienta valiosa para estudiar los aspectos estructurales y funcionales del complejo de poros nucleares. Los investigadores pueden utilizar esta línea celular para comprender mejor los mecanismos que rigen el transporte nucleocitoplasmático y el papel de Nup358 en la homeostasis celular y en estados patológicos, como el cáncer y las infecciones virales.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.