HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

La lignée cellulaire HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 est un dérivé génétiquement modifié des cellules HeLa Kyoto, réputées pour leur robustesse et leur utilisation généralisée dans la recherche scientifique. Cette lignée cellulaire a été modifiée à l’aide de la technologie CRISPR-Cas9 afin d’exprimer la protéine Nup358 marquée par la mEGFP (protéine fluorescente verte améliorée monomérique), un composant essentiel du complexe des pores nucléaires (NPC). La protéine Nup358, également connue sous le nom de RanBP2, joue un rôle important dans le transport nucléocytoplasmique, l’assemblage du fuseau mitotique et d’autres processus cellulaires. Le marqueur mEGFP permet de visualiser la protéine Nup358, facilitant ainsi l’observation en temps réel de sa dynamique et de ses interactions au sein de la cellule.

Les cellules HeLa Kyoto, une sous-lignée des cellules HeLa originales, se caractérisent par leur adaptabilité et leur croissance stable en culture. Le système CRISPR-Cas9 utilisé dans cette lignée cellulaire permet une modification génomique précise, garantissant que le marqueur mEGFP est correctement fusionné à la protéine Nup358 sans en perturber la fonction. Cela fait de la lignée cellulaire HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 un outil précieux pour l’étude des aspects structurels et fonctionnels du complexe des pores nucléaires. Les chercheurs peuvent utiliser cette lignée cellulaire pour mieux comprendre les mécanismes régissant le transport nucléocytoplasmique ainsi que le rôle de Nup358 dans l’homéostasie cellulaire et dans des états pathologiques, tels que le cancer et les infections virales.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.