HK-CRISPR-mEGFP-Nup358
Cell line · Product number 301575
The HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 cell line is a genetically engineered derivative of HeLa Kyoto cells, known for their robustness and widespread use in scientif...
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 細胞系是 HeLa Kyoto 細胞經基因工程改造而成的衍生物，HeLa Kyoto 細胞以其穩健性及在科學研究中的廣泛應用而聞名。 該細胞系經由 CRISPR-Cas9 技術進行改造，以表達帶有 mEGFP（單體增強型綠色螢光蛋白）標記的 Nup358，後者是核孔複合體（NPC）的關鍵組成部分。 Nup358（亦稱 RanBP2）在核質運輸、有絲分裂紡錘體組裝及其他細胞過程中扮演重要角色。mEGFP 標籤可使 Nup358 可視化，便於實時觀察其在細胞內的動態變化與相互作用。
HeLa Kyoto 細胞作為原始 HeLa 細胞的亞系，以其適應性強及體外培養時生長穩定等特性著稱。此細胞系中的 CRISPR-Cas9 系統可實現精確的基因組編輯，確保 mEGFP 標籤能精準地與 Nup358 蛋白融合，同時不影響其功能。 這使得 HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 細胞系成為研究核孔複合體結構與功能方面的寶貴工具。 研究人員可利用此細胞系，深入了解調控核質運輸的機制，以及 Nup358 在細胞內穩態及疾病狀態（如癌症和病毒感染）中所扮演的角色。
- Tissue
- 子宮頸內口
- Disease
- 腺癌
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-integrated mEGFP tag at the RanBP2/Nup358 locus, enabling visualization of cytoplasmic filaments of the nuclear pore. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 呈馬賽克狀石塊形狀的類上皮細胞
04Identifiers
- Citation
- HK-CRISPR-mEGFP-Nup358（Cytion 型號 301575）
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_B7FS
- Depositor
- 艾倫伯格實驗室（EMBL）
05Expression and susceptibility
- Products
- EGFP（增強型綠色螢光蛋白）
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM，含 4.5 g/L 葡萄糖、4 mM L-谷氨醯胺、3.7 g/L NaHCO₃ 及 1.0 mM 丙酮酸鈉（Cytion 產品編號 820300a）
- Incubation atmosphere
37°C，5% CO₂，加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% 的胎牛血清（FBS）
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。 孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
- Fluid renewal
- 每週 2 至 3 次
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
08Donor
- Donor age
- 30年
- Ethnicity
- 非裔美國人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍，必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服，且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時，必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險，此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Warranty
在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Third-party agreements apply
- Yes