HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

สายพันธุ์เซลล์ HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 เป็นสายพันธุ์ที่ดัดแปลงพันธุกรรมจากเซลล์ HeLa Kyoto ซึ่งเป็นที่รู้จักในด้านความทนทานและการใช้งานอย่างแพร่หลายในงานวิจัยทางวิทยาศาสตร์ สายพันธุ์นี้ถูกดัดแปลงโดยใช้เทคโนโลยี CRISPR-Cas9 เพื่อให้แสดงโปรตีน mEGFP (โปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่เพิ่มประสิทธิภาพแบบโมโนเมอร์) ที่ติดแท็กกับ Nup358 ซึ่งเป็นองค์ประกอบสำคัญของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์ (NPC)Nup358 หรือที่รู้จักกันในชื่อ RanBP2 มีบทบาทสำคัญในการขนส่งระหว่างนิวเคลียสและไซโทพลาซึม การประกอบสปินเดิลในกระบวนการไมโทซิส และกระบวนการเซลล์อื่นๆ แท็ก mEGFP ช่วยให้สามารถมองเห็น Nup358 ได้ ทำให้สามารถสังเกตการเคลื่อนไหวและปฏิสัมพันธ์ของมันภายในเซลล์แบบเรียลไทม์

เซลล์ HeLa Kyoto ซึ่งเป็นสายย่อยของเซลล์ HeLa ดั้งเดิม มีลักษณะเด่นคือความสามารถในการปรับตัวและการเจริญเติบโตที่เสถียรในสภาพเพาะเลี้ยง ระบบ CRISPR-Cas9 ในสายเซลล์นี้ช่วยให้สามารถแก้ไขจีโนมได้อย่างแม่นยำ ทำให้แท็ก mEGFP ถูกเชื่อมต่อกับโปรตีน Nup358 ได้อย่างถูกต้องโดยไม่รบกวนการทำงานของโปรตีนดังกล่าวสิ่งนี้ทำให้เซลล์ไลน์ HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าสำหรับการศึกษาโครงสร้างและหน้าที่ของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์ นักวิจัยสามารถใช้เซลล์ไลน์นี้เพื่อทำความเข้าใจกลไกที่ควบคุมการขนส่งระหว่างนิวเคลียสและไซโตพลาซึม รวมถึงบทบาทของ Nup358 ในการรักษาสมดุลของเซลล์และสภาวะโรค เช่น มะเร็งและการติดเชื้อไวรัส

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.