HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

A linhagem celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 é um derivado geneticamente modificado das células HeLa Kyoto, conhecidas por sua robustez e ampla utilização em pesquisas científicas. Essa linha celular foi modificada utilizando a tecnologia CRISPR-Cas9 para expressar Nup358 marcado com mEGFP (proteína fluorescente verde aprimorada monomérica), um componente crucial do complexo de poros nucleares (NPC). A Nup358, também conhecida como RanBP2, desempenha um papel significativo no transporte nucleocitoplasmático, na montagem do fuso mitótico e em outros processos celulares. A marcação com mEGFP permite a visualização da Nup358, facilitando a observação em tempo real de sua dinâmica e interações dentro da célula.

As células HeLa Kyoto, uma sublinha das células HeLa originais, caracterizam-se por sua adaptabilidade e crescimento estável em cultura. O sistema CRISPR-Cas9 nessa linhagem celular permite a edição genômica precisa, garantindo que a marcação mEGFP seja fusionada com precisão à proteína Nup358 sem comprometer sua função. Isso torna a linhagem celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 uma ferramenta valiosa para o estudo dos aspectos estruturais e funcionais do complexo de poros nucleares. Os pesquisadores podem utilizar essa linhagem celular para obter insights sobre os mecanismos que regem o transporte nucleocitoplasmático e o papel da Nup358 na homeostase celular e em estados patológicos, como câncer e infecções virais.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.