- Tissue
- קולורקטלי
- Disease
- אדנוקרצינומה, שלב TNM T4aN1bM1R2L0V1, דירוג G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
- Metastatic site
- קיימת גרורה מרוחקת (TNM M1; שלב T4aN1bM1R2)
Documents
HROC300 T2 M1
Cell line · Product number 300866
HROC300 T2 M1 is a human colorectal carcinoma cell line derived from a primary tumor specimen resected from an adult patient within the HROC (Hansestadt R...
01General information
- Description
HROC300 T2 M1 הוא קו תאים של קרצינומה קולורקטלית אנושית שמקורו בדגימת גידול ראשוני שהוצא מחולה בוגר במסגרת אוסף המודלים HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer). הסימון "T2" מציין שהגידול נלקח בניתוח שני, ואילו "M1" מציין את המודל המקביל שנוצר במבחנה מדגימה זו. פלטפורמת HROC משלבת ביו-בנק מקיף עם יצירה סטנדרטית של שתלים זרים שמקורם בחולים (PDX) וקווי תאים קבועים בעלי מעבר נמוך, המאפשרים יצירת מודלים של גידולים עם הערות מולקולריות ממקרים רצופים של סרטן המעי הגס.
הקמת HROC300 T2 M1 נעשתה על פי פרוטוקול סטנדרטי שכלל פירוק מכני של רקמת הגידול שנותחה זה עתה, סינון להשגת תמיסות תאים בודדים, וזירוז על צלחות תרבית מצופות קולגן בתרבית תאים מוגדרת של תאי גידול, בתוספת גלוטמין, אנטיביוטיקה ואנטימיקוטיקה. בכל קוהורטת HROC, קווי תאים ראשוניים קבועים נוצרו מכ-13% מדגימות קרצינומה של המעי הגס שנבדקו, כאשר הקמתם המוצלחת תואמת בניתוח חד-משתני לדירוג גבוה יותר של הגידול ולסטטוס בלוטות לימפה מתקדם. ניתוח רב-משתני זיהה מעורבות בלוטות לימפה כגורם מנבא עצמאי להקמת מודל מוצלח במבחנה. ממצאים אלה משקפים את העשרת הפנוטיפים הביולוגיים האגרסיביים בקרב תרבויות שהותאמו בהצלחה.
בתוך אוסף HROC הרחב יותר, המודלים כוללים את כל תתי-הסוגים המולקולריים העיקריים של קרצינומה של המעי הגס, כולל חוסר יציבות כרומוזומלית (CIN), פנוטיפ מתילציה של אי CpG (CIMP), מיקרו-לווין יציב (MSS) ומיקרו-לווין לא יציב (MSI-H), וכן רקעים מוטציוניים מגוונים המשפיעים על גנים כגון KRAS, BRAF, TP53, APC ו-PIK3CA. HROC300 T2 M1 נוצר בהקשר זה, המלווה בהערות קפדניות, המאפשרות שילוב עם נתונים קליניים-פתולוגיים תואמים, ובמידת האפשר, עם חומר PDX מתאים. כמודל קרצינומה של המעי הגס הנגזר מחולים, בעל מעבר נמוך, HROC300 T2 M1 מתאים למחקרים של ביולוגיה של גידולים, קשרים בין גנוטיפ לפנוטיפ, ובדיקות טיפוליות פרה-קליניות במסגרת אונקולוגיה מדויקת.
- Tissue
- קולורקטלי
- Disease
- אדנוקרצינומה, שלב TNM T4aN1bM1R2L0V1, דירוג G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
- Metastatic site
- קיימת גרורה מרוחקת (TNM M1; שלב T4aN1bM1R2)
- Applications
- מחקר על סרטן המעי הגס; אדנוקרצינומה של המעי הגס מסוג MSS; מאגר הביולוגי HROC Linnebacher; רגישות לתרופות; מודלים של סרטן המעי הגס בשלב מתקדם; ביולוגיה של הגידול
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- Non-GMO
- GMO status details
- No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- דמוי אפיתל
- Cell type
- תאי אפיתל
- MSI status
- MSS
04Identifiers
- Citation
- HROC300 T2 M1 (מספר קטלוגי Cytion 300866)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_VQ94
05Handling and culture
- Culture medium
- DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L גלוקוז, w: 2.5 mM L-גלוטמין, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM נתרן פירובט, w: 1.2 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי Cytion 820400a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, אווירה לחה.
- Supplements
- הוסף לתווך 10% FBS
- Dissociation reagent
- אקוטאז
- Subculturing
- הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
- Fluid renewal
- כל 3 עד 5 ימים
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.
כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
- Freeze medium
- כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
- Storage conditions
לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.
- Shipping conditions
שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
07Donor
- Donor age
- 73 שנים
- Ethnicity
- קווקזי
08Legal and safety
- Safety precautions
- כאשר מתכננים לאחסן קריוביאל בחנקן נוזלי להפשרה עתידית, חובה להקפיד על אמצעי בטיחות מחמירים. יש להקפיד על שימוש בכפפות ובבגדים מגנים מתאימים, וכן על שימוש במסכת פנים או משקפי מגן בעת העברת דגימות קפואות אל מיכל החנקן הנוזלי או ממנו. זאת כדי להפחית את הסיכון לפציעה כתוצאה מפיצוץ אפשרי של הקריוביאל בעת הוצאתו, העלול לגרום להתזת רסיסים חדים.
- Warranty
ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.
לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו
- Third-party agreements apply
- Yes