Skip to content
HROC300 T2 M1
Tissue
ลำไส้ใหญ่และทวารหนัก
Disease
มะเร็งชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมา, TNM stage T4aN1bM1R2L0V1, ระดับ G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
Metastatic site
มีการแพร่กระจายระยะไกล (TNM M1; ระยะ T4aN1bM1R2)

Documents

HROC300 T2 M1

Cell line · Product number 300866

HROC300 T2 M1 is a human colorectal carcinoma cell line derived from a primary tumor specimen resected from an adult patient within the HROC (Hansestadt R...

€800.00excl. tax and shipping
Made to order
1

01General information

Description

HROC300 T2 M1 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักของมนุษย์ที่ได้มาจากตัวอย่างเนื้องอกปฐมภูมิซึ่งถูกตัดออกจากผู้ป่วยผู้ใหญ่ภายในคอลเลกชันแบบจำลอง HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) การระบุ "T2" หมายถึงเนื้องอกที่ได้จากการผ่าตัดครั้งที่สอง ในขณะที่ "M1" หมายถึงโมเดลในหลอดทดลองที่สร้างขึ้นจากชิ้นเนื้อตัวอย่างนี้ แพลตฟอร์ม HROC ผสานการเก็บรักษาตัวอย่างชีวภาพอย่างครอบคลุมกับการสร้างเซลล์เนื้องอกจากผู้ป่วย (PDX) และสายเซลล์ที่ผ่านการผ่านจำนวนน้อยอย่างมาตรฐาน ช่วยให้สามารถสร้างโมเดลเนื้องอกที่มีการระบุข้อมูลระดับโมเลกุลจากกรณีมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักติดต่อกันได้

การจัดตั้ง HROC300 T2 M1 เป็นไปตามโปรโตคอลมาตรฐานซึ่งประกอบด้วยการแยกเนื้อเยื่อเนื้องอกที่เพิ่งถูกตัดออกด้วยวิธีทางกล การกรองเพื่อให้ได้สารแขวนลอยเซลล์เดี่ยว และการเพาะเลี้ยงบนจานเพาะเลี้ยงที่เคลือบด้วยคอลลาเจนในอาหารเลี้ยงเซลล์เนื้องอกที่กำหนดไว้ ซึ่งเสริมด้วยกลูตามีน ยาปฏิชีวนะ และยาต้านเชื้อรา ในกลุ่มตัวอย่าง HROC ได้มีการสร้างเซลล์ไลน์หลักถาวรจากตัวอย่างมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักที่พยายามประมาณ 13% โดยความสำเร็จในการสร้างเซลล์ไลน์มีความสัมพันธ์กับการจัดระดับเนื้องอกที่สูงขึ้นและสถานะของต่อมน้ำเหลืองที่ก้าวหน้าในการวิเคราะห์แบบตัวแปรเดียว การวิเคราะห์แบบหลายตัวแปรพบว่าการมีส่วนร่วมของต่อมน้ำเหลืองเป็นตัวทำนายอิสระในการสร้างแบบจำลองในหลอดทดลองที่ประสบความสำเร็จ ผลการศึกษานี้สะท้อนถึงการเพิ่มความเข้มข้นของฟีโนไทป์ที่มีความก้าวร้าวทางชีวภาพในกลุ่มวัฒนธรรมที่ปรับตัวได้สำเร็จ

ภายในคอลเลกชัน HROC ที่กว้างขึ้น โมเดลครอบคลุมชนิดย่อยของมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักทั้งหมด รวมถึงชนิดที่มีความไม่เสถียรของโครโมโซม (CIN), ลักษณะเมทิลเลเตอร์ของเกาะ CpG (CIMP), ชนิดที่มีไมโครแซทเทลไลต์คงที่ (MSS) และชนิดที่มีความไม่เสถียรของไมโครแซทเทลไลต์สูง (MSI-H) รวมถึงพื้นหลังการกลายพันธุ์ที่หลากหลายซึ่งส่งผลกระทบต่อยีนต่างๆ เช่น KRAS BRAF, TP53, APC และ PIK3CA HROC300 T2 M1 ถูกสร้างขึ้นในบริบทที่มีการบันทึกอย่างละเอียดถี่ถ้วนนี้ ทำให้สามารถผสานข้อมูลทางคลินิกและพยาธิวิทยาที่ตรงกันได้ และหากมีข้อมูล PDX ที่ตรงกันก็สามารถนำมาใช้ได้เช่นกัน ในฐานะที่เป็นแบบจำลองมะเร็งลำไส้ใหญ่ที่ได้จากผู้ป่วยที่มีการผ่านผ่านน้อย HROC300 T2 M1 เหมาะสำหรับการศึกษาชีววิทยาของเนื้องอก ความสัมพันธ์ระหว่างจีโนไทป์กับฟีโนไทป์ และการทดสอบการรักษาในระยะก่อนคลินิกภายใต้กรอบการแพทย์แม่นยำ

Tissue
ลำไส้ใหญ่และทวารหนัก
Disease
มะเร็งชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมา, TNM stage T4aN1bM1R2L0V1, ระดับ G2, Lk(n) + 3, ∑ Lk(n) 22
Metastatic site
มีการแพร่กระจายระยะไกล (TNM M1; ระยะ T4aN1bM1R2)
Applications
การวิจัย CRC; มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมา MSS; คลังชีวภาพ Linnebacher HROC; ความไวต่อยา; การสร้างแบบจำลอง CRC ระยะสูง; ชีววิทยาของเนื้องอก

02Classification

Organism
Human
Sex
Male
Growth properties
Adherent
GMO status
Non-GMO
GMO status details
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว
Cell type
เซลล์เยื่อบุผิว
MSI status
เอ็มเอสเอส

04Identifiers

Citation
HROC300 T2 M1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 300866)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_VQ94

05Handling and culture

Culture medium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: 2.5 มิลลิโมลาร์ L-กลูตามีน, w: 15 มิลลิโมลาร์ HEPES, w: 0.5 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต, w: 1.2 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820400a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Fluid renewal
ทุก 3 ถึง 5 วัน
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

07Donor

Donor age
73 ปี
Ethnicity
คอเคเชียน