HROC300 T2 M1

HROC300 T2 M1 é uma linhagem celular de carcinoma colorretal humano derivada de uma amostra de tumor primário ressecada de um paciente adulto, pertencente à coleção modelo HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer). A designação “T2” indica que o tumor foi obtido em um segundo momento cirúrgico, enquanto “M1” denota o modelo in vitro correspondente estabelecido a partir dessa amostra. A plataforma HROC integra um biobanco abrangente com a geração padronizada de xenoenxertos derivados de pacientes (PDX) e linhagens celulares permanentes de baixa passagem, possibilitando modelos tumorais com anotação molecular a partir de casos consecutivos de câncer colorretal.

O estabelecimento do HROC300 T2 M1 seguiu um protocolo padronizado envolvendo a dissociação mecânica do tecido tumoral recém-ressecado, a filtração para obter suspensões de células únicas e a semeadura em placas de cultura revestidas com colágeno, em meio de cultura de células tumorais definido, suplementado com glutamina, antibióticos e antimicóticos. Em toda a coorte HROC, linhas celulares primárias permanentes foram geradas a partir de aproximadamente 13% das amostras de carcinoma colorretal submetidas à tentativa, com o estabelecimento bem-sucedido se correlacionando, na análise univariada, com maior grau tumoral e estado linfonodal avançado. A análise multivariada identificou o envolvimento linfonodal como um preditor independente do estabelecimento bem-sucedido do modelo in vitro. Esses achados refletem o enriquecimento de fenótipos biologicamente agressivos entre as culturas adaptadas com sucesso.

Dentro da coleção mais ampla do HROC, os modelos abrangem todos os principais subtipos moleculares do carcinoma colorretal, incluindo instabilidade cromossômica (CIN), fenótipo de metilação de ilhas CpG (CIMP), tumores com microssatélites estáveis (MSS) e com alta instabilidade de microssatélites (MSI-H), bem como diversos contextos mutacionais que afetam genes como KRAS, BRAF, TP53, APC e PIK3CA. O HROC300 T2 M1 foi gerado nesse contexto rigorosamente anotado, permitindo a integração com dados clínico-patológicos correspondentes e, quando disponível, com o material PDX correspondente. Por ser um modelo de carcinoma colorretal derivado de paciente com poucas passagens, o HROC300 T2 M1 é adequado para estudos de biologia tumoral, associações genótipo-fenótipo e testes terapêuticos pré-clínicos dentro de uma estrutura de oncologia de precisão.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.