LN229

A LN229 é uma linhagem celular de glioblastoma humano derivada de uma paciente branca de 60 anos com glioblastoma multiforme (GBM), especificamente do córtex frontal-parieto-occipital direito. O glioblastoma é uma das formas mais agressivas e letais de câncer cerebral, e as células LN229 são amplamente utilizadas em pesquisas para compreender os fundamentos moleculares da doença e desenvolver possíveis estratégias terapêuticas. As células apresentam uma morfologia semelhante à epitelial e exibem propriedades de crescimento aderente, o que as torna ideais para estudos in vitro. Devido ao seu alto potencial tumorigênico, elas formam tumores facilmente quando injetadas em camundongos nude, tornando-as um modelo robusto para a pesquisa do câncer.

Uma das características fundamentais das células LN229 é a presença de uma mutação no gene p53 (TP53), com uma mutação específica de CCT (Pro) para CTT (Leu) no códon 98. Essa mutação contribui significativamente para o comportamento agressivo da linhagem celular e sua resistência à apoptose. Além disso, as células LN229 possuem um gene PTEN do tipo selvagem, mas apresentam deleções homozigotas nos genes supressores de tumor p16 e p14ARF, que são reguladores vitais do ciclo celular e da apoptose. Essas alterações genéticas tornam a LN229 um modelo valioso para o estudo do impacto dessas mutações na biologia tumoral e na resistência terapêutica.

As células LN229 são particularmente úteis em estudos de apoptose. Elas sofrem apoptose após estimulação com o ligante de Fas, com a morte celular ocorrendo em até 16 horas. Curiosamente, embora a expressão de Bcl-2 possa proteger as células LN229 da apoptose induzida pelo ligante de Fas, ela oferece apenas proteção limitada contra a apoptose induzida pela puromicina, um inibidor da síntese proteica. Esse padrão de resistência seletiva torna as células LN229 um modelo essencial para compreender os mecanismos moleculares da apoptose no glioblastoma e para testar possíveis terapias moduladoras da apoptose. Assim como todos os modelos de pesquisa in vitro, as células LN229 não são adequadas para aplicações terapêuticas ou in vivo.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.