A375 細胞系——黑色素瘤研究指南

A375 是一種廣泛應用於毒理學及免疫腫瘤學研究的人類黑色素瘤細胞系。研究人員利用此細胞系來研究癌症生物學與訊號傳導路徑、測試或篩選潛在的抗癌藥物，並開發新型且有效的治療方法。

A375 細胞的來源與一般特性

了解細胞系的來源與一般特性，有助於您規劃其在研究中的應用。本文此部分將介紹 A375 細胞系的來源與特徵。例如，什麼是 A375 細胞系？ A375 細胞系的特徵為何？A375 細胞源自何處？A375 黑色素瘤細胞的形態為何？A375 細胞的大小為何？

• 皮膚癌細胞系 A375 源自一名 54 歲女性惡性黑色素瘤患者實體腫瘤的組織塊培養 [1]。
• A375 細胞具有上皮樣形態。
• 相較於其他細胞系，A375 細胞的體積相對較小，其直徑約為 12 µm。
• A375黑色素瘤細胞屬於低三倍體。該細胞系的模態染色體數為62。通常，每個細胞具有九條標記染色體，以及各一份正常的N2、N6和N22染色體。

一名醫生正在檢查一名成年人皮膚上的腫塊，以確認是否為皮膚癌。

A375 細胞：細胞培養資訊

A375 細胞培養易於維護，對培養條件並無特別苛刻的要求。本節將協助您了解必要的細胞培養資訊，例如 A375 的倍增時間為何。 A375 細胞系的培養基為何？A375 的接種密度是多少？A375 黑色素瘤細胞是否為貼壁細胞？

培養 A375 細胞的重點

細胞倍增時間：

A375 細胞的倍增時間為 20 小時。

黏附型或懸浮型：

A375 是一種黏附型人類黑色素瘤細胞系。

接種密度：

1 × 10^⁴ 細胞/cm^² 的細胞密度最適合 A375 細胞培養。貼壁細胞先以 1× 磷酸鹽緩衝生理鹽水 (PBS) 沖洗，再與傳代溶液（Accutase）一起孵育。 隨後，向細胞中加入培養基並進行離心。收集的細胞重新懸浮於培養基中，並分裝至新的培養瓶中進行增殖。

生長培養基：

建議使用 DMEM 作為 A375 細胞的理想培養基，並需添加 10% 胎牛血清 (FBS)、4.5 g/L 葡萄糖、1.5 g/L NaHCO₃、4 mM L-谷氨醯胺及 1.0 mM 丙酮酸鈉。 A375 培養基應每週更換 2-3 次。

培養條件：

A375 黑色素瘤細胞應於加濕培養箱（37°C）中培養，並維持 5% 二氧化碳濃度。

儲存：

冷凍的 A375 細胞應保存在液態氮的氣相中或電冷凍櫃內，溫度需低於 -150°C。

冷凍程序與培養基：

使用 CM-1 或 CM-ACF 培養基來冷凍 A375 細胞系。為保護細胞存活率，採用緩慢冷凍法，使溫度以每小時 1°C 的速率逐漸降低。

解凍程序：

將冷凍的 A375 黑色素瘤細胞試管置於水浴中快速搖晃 40 至 60 秒，直至僅剩一小塊冰塊。向細胞中加入新鮮培養基，並進行離心以去除冷凍培養基成分。將獲得的細胞沉澱再次懸浮，並倒入新的培養瓶中。

生物安全等級：

A375 細胞培養的處理與維護均於生物安全等級 1 的實驗室環境中進行。

20倍放大倍率下，緊密貼附的 A375 細胞層。

A375 細胞系的優點與局限性

與其他細胞系一樣，A375 黑色素瘤細胞系兼具獨特的優點與限制，使其成為黑色素瘤癌症研究中極具價值的工具。本節僅列舉了 A375 細胞系的幾項重要優點與缺點。

優點

A375 細胞的主要優勢如下：

• 黑色素瘤腫瘤模型：A375 細胞系源自惡性黑色素瘤腫瘤，因此是研究黑色素瘤生物學及治療干預措施的無價腫瘤模型。這些細胞展現出類似黑色素瘤的特性，例如高增殖率與侵襲性。
• 致瘤性：A375 細胞具有高度致瘤性，意即其能形成腫瘤。據報導，在經抗胸腺細胞血清（一種免疫抑制劑）處理的 NIH Swiss 小鼠身上，A375 細胞會產生具侵襲性的無色素性黑色素瘤。
• 特徵明確：A375 是一種基因特徵明確的細胞系。它具有與黑色素瘤相似的特定基因突變。 A375 的突變包括 A375 BRAF 基因變異，使其對 BRAF 特異性抑制劑敏感。因此，這種基因特徵使 A375 細胞成為研究潛在分子路徑和標靶治療的絕佳癌症研究工具。

限制

與 A375 細胞相關的限制包括：

• 體外限制：A375 是一種體外腫瘤模型。儘管它模擬了黑色素瘤的特徵，但無法完全呈現黑色素瘤腫瘤的複雜性。因此，將體外研究結果推廣至臨床研究時須謹慎。

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A375 細胞系的研究應用

A375 細胞系在癌症研究領域具有廣泛的應用。以下列舉 A375 細胞常見的應用領域。

• 癌症研究：A375 細胞在黑色素瘤研究中具有廣泛的應用。研究人員利用這些細胞來探究皮膚癌的生物學特性、病理過程及潛在的細胞訊號傳導機制，包括細胞增殖、遷移與侵襲。這也有助於研究人員識別新的分子治療靶點。 林朱（Lin Zhu）及其同事於 2019 年進行的一項研究，利用高度侵襲性的黑色素瘤細胞 A375，發現了微小核糖核酸-3662（microRNA-3662）在 A375 黑色素瘤細胞生長與侵襲中的作用。 研究結果指出，microRNA-3662 以 ZEB1 基因為靶點，並在 A375 腫瘤模型中，於體外及體內環境下調節黑色素瘤細胞的生長 [2]。 同樣地，2018年的一項研究發現，PI3K/AKT和MAPK/ERK路徑參與了A375細胞系的增殖與轉移[3]。
• 藥物發現與測試：A375 細胞系是測試與篩選潛在抗癌藥物的有用體外腫瘤模型。研究人員利用這些 A375 黑色素瘤細胞，評估新型化療藥物、化合物及其他療法的毒性與療效。 例如，一項研究探討了源自葡萄柚的微囊與奈米囊泡對 A375 人類黑色素瘤癌細胞的抗癌特性。結果顯示，微囊與奈米囊泡會誘導細胞週期停滯與凋亡，並抑制細胞增殖、遷移及侵襲過程中的基因表達 [4]。

A375 細胞：相關文獻

此處列舉了若干以 A375 細胞為研究對象的重要學術文獻。

維生素 D 及其低鈣血症類化合物可調節順鉑與達卡巴嗪在人類黑色素瘤 A375 細胞系中的抗癌特性

這項研究於 2019 年發表於《腫瘤學雜誌》（Journal of Oncology）。研究提出，維生素 D 及其類似物與順鉑及達卡巴嗪聯合治療，可增強這兩種藥物在 A375 黑色素瘤細胞中的抗癌活性。

精選蘆薈物種之凝膠與整葉萃取物對黑色素瘤（A375細胞系）之抗腫瘤效果之體外評估

這項研究於2022年發表於《草藥醫學期刊》。本研究探討了蘆薈凝膠在A375黑色素瘤細胞中的抗黑色素瘤效果。

Fermitin家族成員2透過增強p-α-Pix與Rac1的結合以激活MAPK通路，從而促進黑色素瘤進展

這項發表於《Oncogene》（2021年）的研究提出，Fermitin家族成員2（FERMT2 或 kindlin-2）是透過與 p-α-Pix 及 Rac1 結合，進而激活 MAPK，從而促進黑色素瘤進展。

FARP1 透過調控皮膚黑色素瘤中的 MAPK 訊號傳導路徑促進細胞增殖

這項發表於《美國皮膚病理學雜誌》（2019年）的研究提出，FARP1 可能促進皮膚黑色素瘤的發病與進展。因此，它可作為有用的治療靶點。

Phyllodium elegans 萃取物對人類癌細胞系的細胞毒性與凋亡潛力

這篇研究論文發表於《Bioengineered》（2019年）。本研究探討了植物 Phyllodium elegans 萃取物對人類癌細胞系（包括 A375）的細胞毒性與凋亡活性。

A375 細胞系的相關資源：實驗方案、影片及其他

以下是幾個以 A375 細胞為主題的線上資源。

• A375 細胞轉染：這段教學影片將引導您逐步學習 A375 細胞的轉染步驟。
• 細胞培養：這段影片提供了關於細胞系培養的極具實用價值的資訊。

A375 細胞的細胞培養操作指南列於此處。

• A375 細胞系：此連結包含有關 A375 細胞系培養與維護的實用資訊，包括 A375 培養基，以及冷凍與增殖中 A375 細胞培養物的處理方法。

參考文獻

1. Avram, S. 等，基於雞胚絨毛尿囊膜及 Balb/c 裸鼠之 A375 人類黑色素瘤模型標準化。《Oncol Rep》，2017 年，38(1)：第 89-99 頁。
2. Zhu, L. 等，微RNA-3662 靶向 ZEB1 並抑制高度侵襲性黑色素瘤細胞系 A375 的侵襲。《癌症管理與研究》，2019 年，11 期：第 5845-5856 頁。
3. 彭，X.等人，Oxyfadichalcone C 透過抑制 PI3K/Akt 及 MAPK/ERK 途徑，抑制黑色素瘤 A375 細胞的增殖與轉移。《生命科學》，2018。206：第 35-44 頁。
4. Stanly, C.等人，源自葡萄柚的微囊與奈米囊泡在A375人類黑色素瘤細胞系中展現出獨特的代謝組學特徵與抗癌活性。《細胞》，2020年，第9卷第12期：第2722頁。