B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 là dòng tế bào lymphoblastoid B được bất tử hóa bởi virus Epstein-Barr (EBV), được thiết lập từ các tế bào B xâm nhập khối u (TiBc) được tách ra từ mẫu khối u đại tràng nguyên phát được chỉ định là HROC69. Khối u gốc xuất phát từ một bệnh nhân nam trưởng thành bị ung thư đại tràng bên phải loại thông thường, không di truyền và ở giai đoạn tiến triển. Các tế bào B được tách ra từ mô khối u mới được phẫu thuật cắt bỏ và bất tử hóa ex vivo bằng cách sử dụng dịch nuôi cấy từ dòng tế bào B95/8 của khỉ marmoset sản xuất EBV, kết hợp với cyclosporin A để ức chế sự phát triển của tế bào T và NK. Sự phát triển của các dòng tế bào B biến đổi bởi EBV thường xảy ra trong vòng vài tuần, và tính đơn dòng được xác nhận bằng phân tích sắp xếp gen chuỗi nặng và nhẹ của immunoglobulin sử dụng các giao thức PCR đa mồi BIOMED-2.

B-LCL-HROC69 tiết ra immunoglobulin A (IgA), được xác định bằng ELISA đặc hiệu isotype trên dịch nuôi cấy lâu dài. Khác với một số dòng TiBc sản xuất IgG được thiết lập song song, IgA từ HROC69 không được đặc trưng thêm về khả năng gắn vào tế bào ung thư trong các thử nghiệm sàng lọc chức năng ban đầu. Đáng chú ý, không có sự phát triển tự phát của các văn hóa tế bào B xảy ra trong điều kiện không có EBV ngoại sinh, cho thấy quá trình bất tử hóa là một sự kiện in vitro chứ không phải hậu quả của nhiễm trùng EBV tiềm ẩn in vivo. B-LCL-HROC69 do đó đại diện cho một mô hình tế bào B xâm nhập khối u đơn dòng, đã tiếp xúc với kháng nguyên, phù hợp để nghiên cứu phản ứng miễn dịch dịch thể trong vi môi trường ung thư đại trực tràng và để xác định tiềm năng các kháng nguyên liên quan đến khối u được nhận diện bởi các dòng tế bào B mở rộng tại chỗ.

37°C, 5%_CO₂, môi trường ẩm.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

Tại Cytion, chúng tôi cam kết về chất lượng và khả năng sống của các sản phẩm của mình. Chúng tôi đảm bảo rằng các tế bào của chúng tôi sẽ có khả năng sống tại thời điểm bắt đầu nuôi cấy trong 60 ngày kể từ khi vận chuyển từ cơ sở của chúng tôi. Chúng tôi cam kết rằng tất cả các vật liệu tuân thủ các thông số kỹ thuật được mô tả trong Giấy chứng nhận phân tích và/hoặc Tài liệu sản phẩm.

Để biết chi tiết đầy đủ, vui lòng tham khảo <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Tuyên bố Bảo hành.