B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69系由原发性结直肠癌标本HROC69中分离的肿瘤浸润性B细胞（TiBc）建立的、经爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）永生化的B淋巴母细胞样细胞系。该亲本肿瘤源自一名成年男性患者，其患有常规散发型右侧结直肠癌且处于晚期。 B细胞从新鲜切除的肿瘤组织中分离，并在环孢素A抑制T细胞和NK细胞增殖的条件下，利用EBV阳性狨猴细胞系B95/8的上清液进行体外永生化处理。 EBV转化的B细胞克隆通常在数周内增殖，其克隆性通过采用BIOMED-2多重PCR方案进行免疫球蛋白重链和轻链基因重排分析得到确认。

通过对长期培养上清液进行同种型特异性ELISA检测，发现B-LCL-HROC69细胞可分泌免疫球蛋白A（IgA）。与平行建立的若干IgG产生型TiBc细胞系不同，HROC69来源的IgA在初始功能筛选实验中未进一步进行肿瘤细胞结合特性鉴定。 关键的是，在无外源性EBV存在的情况下，B细胞培养物未发生自发性增殖，表明该永生化过程属于体外事件，而非体内EBV潜伏感染的结果。 因此，B-LCL-HROC69作为单克隆、抗原经历的肿瘤浸润性B细胞模型，适用于研究结直肠癌微环境中的体液免疫应答，并可用于识别被局部扩增B细胞克隆识别的肿瘤相关抗原。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。

有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。