B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 ist eine durch das Epstein-Barr-Virus (EBV) immortalisierte B-Lymphoblastenzelllinie, die aus tumorinfiltrierenden B-Zellen (TiBc) etabliert wurde, die aus einer primären kolorektalen Karzinomprobe mit der Bezeichnung HROC69 isoliert wurden. Der ursprüngliche Tumor stammte von einem erwachsenen männlichen Patienten mit einem rechtsseitigen kolorektalen Karzinom vom konventionellen sporadischen Typ und fortgeschrittenem Krankheitsstadium. Die B-Zellen wurden aus frisch reseziertem Tumorgewebe isoliert und ex vivo unter Verwendung des Überstands der EBV-produzierenden B95/8-Marmoset-Zelllinie in Gegenwart von Cyclosporin A immortalisiert, um das Wachstum von T- und NK-Zellen zu unterdrücken. Das Wachstum von EBV-transformierten B-Zellklonen erfolgte typischerweise innerhalb weniger Wochen, und die Klonalität wurde durch eine Analyse der Neuanordnung der schweren und leichten Ketten des Immunglobulins unter Verwendung von BIOMED-2-Multiplex-PCR-Protokollen bestätigt.

B-LCL-HROC69 sekretiert Immunglobulin A (IgA), wie durch isotypspezifischen ELISA von Langzeitkulturüberständen bestimmt wurde. Im Gegensatz zu mehreren parallel etablierten IgG-produzierenden TiBc-Linien wurde IgA aus HROC69 in den ersten funktionellen Screening-Assays nicht weiter auf Tumorzellbindung charakterisiert. Wichtig ist, dass ohne exogenes EBV kein spontanes Wachstum der B-Zell-Kulturen auftrat, was darauf hindeutet, dass die Immortalisierung ein In-vitro-Ereignis ist und nicht die Folge einer latenten EBV-Infektion in vivo. B-LCL-HROC69 stellt daher ein monoklonales, antigenerfahrenes, tumorinfiltrierendes B-Zell-Modell dar, das sich für die Untersuchung humoraler Immunantworten innerhalb der Mikroumgebung von kolorektalen Karzinomen und für die potenzielle Identifizierung von tumorassoziierten Antigenen eignet, die von lokal expandierten B-Zell-Klonen erkannt werden.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung