B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 is een door het Epstein-Barr-virus (EBV) geïmmortaliseerde B-lymfoblastoïde cellijn die is opgezet uit tumor-infiltrerende B-cellen (TiBc) die zijn geïsoleerd uit een primair colorectaal carcinoomspecimen met de aanduiding HROC69. De oorspronkelijke tumor was afkomstig van een volwassen mannelijke patiënt met een rechtszijdig colorectaal carcinoom van het conventionele sporadische type en een vergevorderd stadium van de ziekte. B-cellen werden geïsoleerd uit vers verwijderd tumorweefsel en ex vivo geïmmortaliseerd met behulp van supernatant van de EBV-producerende B95/8-marmosetcellijn in aanwezigheid van cyclosporine A om de groei van T- en NK-cellen te onderdrukken. De groei van EBV-getransformeerde B-celklonen vond doorgaans binnen enkele weken plaats en de klonaliteit werd bevestigd door analyse van de herschikking van zware en lichte ketens van immunoglobuline-genen met behulp van BIOMED-2 multiplex PCR-protocollen.

B-LCL-HROC69 scheidt immunoglobuline A (IgA) af, zoals bepaald door isotype-specifieke ELISA van langdurige kweeksupernatanten. In tegenstelling tot verschillende IgG-producerende TiBc-lijnen die parallel werden opgezet, werd IgA afkomstig van HROC69 niet verder gekarakteriseerd voor tumorcelbinding in de initiële functionele screeningtests. Belangrijk is dat er geen spontane uitgroei van B-celculturen optrad in afwezigheid van exogeen EBV, wat erop wijst dat de immortaliteit een in vitro-verschijnsel is en niet het gevolg van een latente EBV-infectie in vivo. B-LCL-HROC69 vertegenwoordigt daarom een monoklonaal, antigeen-ervaren tumor-infiltrerend B-celmodel dat geschikt is voor het onderzoeken van humorale immuunresponsen binnen de micro-omgeving van colorectaal carcinoom en voor de mogelijke identificatie van tumor-geassocieerde antigenen die worden herkend door lokaal geëxpandeerde B-celklonen.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring