B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 je buněčná linie B lymfoblastoidních buněk imortalizovaná virem Epstein-Barr (EBV), vytvořená z nádorových infiltrujících B buněk (TiBc) izolovaných z primárního vzorku kolorektálního karcinomu označeného jako HROC69. Původní nádor pocházel od dospělého muže s pravostranným kolorektálním karcinomem konvenčního sporadického typu a pokročilým stadiem onemocnění. B buňky byly izolovány z čerstvě resekované nádorové tkáně a imortalizovány ex vivo pomocí supernatantu z EBV produkující buněčné linie B95/8 marmoset v přítomnosti cyklosporinu A k potlačení růstu T a NK buněk. K růstu klonů B buněk transformovaných EBV obvykle docházelo během několika týdnů a klonalita byla potvrzena analýzou přestavby genů těžkých a lehkých řetězců imunoglobulinu pomocí multiplexních PCR protokolů BIOMED-2.

B-LCL-HROC69 sekretuje imunoglobulin A (IgA), jak bylo stanoveno pomocí izotypově specifického ELISA dlouhodobých kultivačních supernatantů. Na rozdíl od několika paralelně vytvořených linií TiBc produkujících IgG nebyl IgA pocházející z HROC69 dále charakterizován z hlediska vazby na nádorové buňky v počátečních funkčních screeningových testech. Důležité je, že v nepřítomnosti exogenního EBV nedošlo k žádnému spontánnímu růstu B-buněčných kultur, což naznačuje, že imortalizace je spíše in vitro jevem než důsledkem latentní infekce EBV in vivo. B-LCL-HROC69 proto představuje monoklonální model B-buněk infiltrujících nádor, které mají zkušenost s antigenem, vhodný pro zkoumání humorálních imunitních odpovědí v mikroprostředí kolorektálního karcinomu a pro potenciální identifikaci nádorových antigenů rozpoznávaných lokálně expandovanými klony B-buněk.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení