B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 es una línea celular linfoblastoide B inmortalizada por el virus de Epstein-Barr (VEB) establecida a partir de células B infiltrantes tumorales (TiBc) aisladas de una muestra de carcinoma colorrectal primario denominada HROC69. El tumor parental se originó en un paciente varón adulto con carcinoma colorrectal del lado derecho de tipo esporádico convencional y enfermedad en estadio avanzado. Las células B se aislaron del tejido tumoral recién resecado y se inmortalizaron ex vivo utilizando el sobrenadante de la línea celular B95/8 de tití que produce EBV en presencia de ciclosporina A para suprimir el crecimiento de las células T y NK. El crecimiento de los clones de células B transformadas por el VEB se produjo normalmente en varias semanas, y la clonalidad se confirmó mediante el análisis del reordenamiento de los genes de las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina utilizando protocolos de PCR multiplex BIOMED-2.

B-LCL-HROC69 secreta inmunoglobulina A (IgA), según se determinó mediante ELISA específico de isotipo de sobrenadantes de cultivos a largo plazo. A diferencia de varias líneas TiBc productoras de IgG establecidas en paralelo, la IgA derivada de HROC69 no se caracterizó más para la unión de células tumorales en los ensayos de cribado funcional iniciales. Es importante destacar que no se produjo un crecimiento espontáneo de los cultivos de células B en ausencia de EBV exógeno, lo que indica que la inmortalización es un evento in vitro y no la consecuencia de una infección latente por EBV in vivo. Por lo tanto, B-LCL-HROC69 representa un modelo de células B monoclonal, con experiencia antigénica e infiltradas en tumores, adecuado para investigar las respuestas inmunitarias humorales en el microambiente del carcinoma colorrectal y para la posible identificación de antígenos asociados a tumores reconocidos por clones de células B expandidos localmente.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía