B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 er en Epstein-Barr-virus (EBV)-immortaliserte B-lymfoblastoidcellelinje etablert fra tumorinfiltrerende B-celler (TiBc) isolert fra et primært kolorektalt karsinomprøve betegnet HROC69. Den opprinnelige tumoren stammer fra en voksen mannlig pasient med høyre-sidig kolorektalt karsinom av konvensjonell sporadisk type og avansert stadium. B-celler ble isolert fra ferskt resektert tumorvev og immortalisert ex vivo ved hjelp av supernatant fra den EBV-produserende B95/8-marmosetcelle-linjen i nærvær av cyklosporin A for å undertrykke T- og NK-cellevekst. Utvekst av EBV-transformerte B-cellekloner skjedde vanligvis i løpet av flere uker, og klonaliteten ble bekreftet ved analyse av immunoglobulin-tung- og lettkjede-genomarrangement ved hjelp av BIOMED-2 multiplex PCR-protokoller.

B-LCL-HROC69 sekreterer immunoglobulin A (IgA), som bestemt ved isotypespesifikk ELISA av langvarige kultursupernatanter. I motsetning til flere IgG-produserende TiBc-linjer etablert parallelt, ble IgA avledet fra HROC69 ikke videre karakterisert for tumorcellebinding i de innledende funksjonelle screeningtestene. Det er viktig å merke seg at det ikke forekom spontan utvekst av B-cellekulturer i fravær av eksogent EBV, noe som indikerer at immortaliseringen er en in vitro-hendelse snarere enn en konsekvens av latent EBV-infeksjon in vivo. B-LCL-HROC69 representerer derfor en monoklonal, antigenerfarne tumorinfiltrerende B-cellemodell som er egnet for å undersøke humorale immunresponser i mikromiljøet til kolorektal karsinom og for potensiell identifisering av tumorassosierte antigener som gjenkjennes av lokalt ekspanderte B-cellekloner.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring