B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 je linija B-limfoblastoidnih celic, nesmrtonosnih zaradi virusa Epstein-Barr (EBV), ki je bila vzpostavljena iz tumorja infiltrirajočih B-celic (TiBc), izoliranih iz primarnega vzorca kolorektalnega karcinoma, označenega kot HROC69. Izvorni tumor je izviral od odraslega moškega pacienta z desnostranskim kolorektalnim karcinomom konvencionalnega sporadičnega tipa in napredovalim stadijem bolezni. B-celice so bile izolirane iz sveže odstranjenega tumorja in imortalizirane ex vivo z uporabo supernatanta iz linije celic marmoset B95/8, ki proizvajajo EBV, v prisotnosti ciklosporina A za zaviranje rasti T- in NK-celic. Rast klonov B-celic, transformiranih z EBV, se je običajno pojavila v nekaj tednih, klonalnost pa je bila potrjena z analizo preureditve genov težkih in lahkih verig imunoglobulina z uporabo protokolov BIOMED-2 multiplex PCR.

B-LCL-HROC69 izloča imunoglobulin A (IgA), kot je bilo ugotovljeno z izotipsko specifičnim ELISA dolgoročnih kultiviranih supernatantov. V nasprotju z več linijami TiBc, ki proizvajajo IgG, vzpostavljenimi vzporedno, IgA, pridobljen iz HROC69, ni bil nadalje karakteriziran za vezavo tumorskih celic v začetnih funkcionalnih presejalnih testih. Pomembno je, da se v odsotnosti eksogenega EBV ni pojavila spontana rast B-celic, kar kaže, da je imortalizacija in vitro dogodek in ne posledica latentne EBV okužbe in vivo. B-LCL-HROC69 zato predstavlja monoklonalni model B-celic, ki so izpostavljene antigenom in infiltrirajo tumor, primeren za preučevanje humoralnih imunskih odzivov v mikrookolju kolorektalnega karcinoma in za potencialno identifikacijo tumorjev povezanih antigenov, ki jih prepoznajo lokalno razširjeni kloni B-celic.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo