B-LCL-HROC69

A B-LCL-HROC69 egy Epstein-Barr vírus (EBV) által halhatatlanná tett B-limfoblasztos sejtvonal, amelyet HROC69 nevű primer kolorektális karcinóma mintából izolált tumorbehatoló B-sejtekből (TiBc) hoztak létre. A szülői tumor egy felnőtt férfi betegtől származik, aki jobb oldali kolorektális karcinómában szenvedett, amely hagyományos sporadikus típusú és előrehaladott stádiumú volt. A B-sejteket frissen reszekált tumor szövetből izolálták, és ex vivo immortálisították az EBV-termelő B95/8 marmoset sejtvonal felülúszójával, ciklosporin A jelenlétében, a T- és NK-sejtek növekedésének gátlására. Az EBV-transzformált B-sejtklónok növekedése általában néhány héten belül bekövetkezett, és a klonalitást BIOMED-2 multiplex PCR protokollok alkalmazásával végzett immunglobulin nehéz- és könnyű lánc génátrendeződés elemzéssel igazolták.

A B-LCL-HROC69 immunglobulin A-t (IgA) szekretál, amit a hosszú távú tenyészet felülúszóiból végzett izotípus-specifikus ELISA-val állapítottak meg. A párhuzamosan létrehozott több IgG-termelő TiBc vonallal ellentétben a HROC69-ből származó IgA-t nem jellemezték tovább a tumorsejtekhez való kötődés szempontjából a kezdeti funkcionális szűrési vizsgálatokban. Fontos megjegyezni, hogy exogén EBV hiányában nem történt spontán B-sejt-tenyészetek növekedése, ami arra utal, hogy az immortalizáció in vitro esemény, és nem a látens EBV-fertőzés in vivo következménye. A B-LCL-HROC69 ezért egy monoklonális, antigénnel tapasztalt, tumorba behatoló B-sejt modell, amely alkalmas a kolorektális karcinóma mikrokörnyezetén belüli humorális immunválaszok vizsgálatára és a lokálisan expandált B-sejt klónok által felismert tumorral kapcsolatos antigének potenciális azonosítására.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban